[發明專利]用于體外干細胞增殖和組織再生的生長基質

在審

• 申請號: 201480018759.0
• 申請日: 2014-01-28
• 公開（公告）號: CN105143442A
• 公開（公告）日: 2015-12-09
• 發明（設計）人: S·利維森;N·什科普;F·卡爾德隆;C·趙;C·甘地
• 申請（專利權）人: 新澤西魯特格斯州立大學;新澤西理工學院
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00
• 代理公司: 隆天知識產權代理有限公司 72003
• 代理人: 吳小瑛;王芝艷

1.一種培養干細胞的方法，其包括

制備多功能基質，其具有下列步驟：

干燥脫乙酰殼多糖溶液以形成脫乙酰殼多糖層；

用堿性溶液中和脫乙酰殼多糖層的酸度；

將生長促進蛋白結合配偶體附著至脫乙酰殼多糖層；

用京尼平將生長促進蛋白結合配偶體交聯至脫乙酰殼多糖層；

施加生長促進蛋白的溶液；和

允許生長促進蛋白附著至脫乙酰殼多糖層；

接種一種或多種干細胞到多功能基質；和

在限定的飼喂條件下培養干細胞。

2.如權利要求1所述的方法，其中制備多功能基質還包括下列步驟：

施加附著組分的溶液；和

允許附著組分附著至脫乙酰殼多糖層。

3.如權利要求1所述的方法，其中生長促進蛋白結合配偶體是肝素、硫酸乙酰肝素或硫酸乙酰肝素的類似物。

4.如權利要求3所述的方法，其中生長促進蛋白結合配偶體是肝素。

5.如權利要求1所述的方法，其中在多功能基質上培養的干細胞保持多能和增殖狀態而無任何可溶性生長促進蛋白。

6.如權利要求1所述的方法，其中干細胞選自胚胎干細胞、多能干細胞、成體干細胞、脂肪來源的干細胞、間質干細胞、造血干細胞、臍帶血干細胞、少突膠質細胞祖細胞、FGF反應祖細胞、誘導的多能干細胞(iPSC)和iPSC來源的干細胞。

7.如權利要求1所述的方法，其中多功能基質是2維的，且干細胞選自hESC和iPSC。

8.如權利要求1所述的方法，其中多功能基質是3維的。

9.如權利要求1所述的方法，其中基質不包含異種組分。

10.如權利要求6所述的方法，其中干細胞是哺乳動物的，優選嚙齒類的、靈長類的或人類的。

11.如權利要求1所述的方法，其中生長促進蛋白選自FGF、PDGF、EGF和HB-EGF。

12.如權利要求1所述的方法，其中FGF是FGF-2。

13.如權利要求2所述的方法，其中附著組分是選自纖連蛋白、層粘連蛋白、玻連蛋白、原纖蛋白、纖維蛋白原、纖溶酶原、纖維蛋白溶酶、聚蛋白多糖、短蛋白聚糖、肌腱蛋白、膠原蛋白、彈性蛋白、透明質酸蛋白多糖、硫酸角質素蛋白聚糖、硫酸乙酰肝素蛋白聚糖、硫酸軟骨素蛋白多糖、多配體蛋白聚糖-1(蛋白聚糖)和IGF結合蛋白的細胞外基質蛋白。

14.如權利要求2所述的方法，其中附著組分是具有包含RGD或IKVAV的肽序列的細胞外基質肽。

15.如權利要求1所述的方法，其中干細胞在3天內飼喂至多1次。

16.一種制備促進細胞遞送到損傷組織的載體的方法，所述方法包括

使用電流產生具有30-100μm之間尺寸的脫乙酰殼多糖微球；

將生長促進蛋白結合配偶體附著至脫乙酰殼多糖層

使用京尼平將生長促進蛋白結合配偶體交聯至脫乙酰殼多糖層；

施加生長促進蛋白的溶液；

施加附著組分的溶液；和

允許生長促進蛋白和附著組分附著至脫乙酰殼多糖微球。

17.如權利要求15所述的方法，其中生長促進蛋白結合配偶體是肝素，生長促進蛋白是FGF-2。

18.如權利要求16所述的方法，其中附著組分是纖連蛋白。

19.如權利要求16所述的方法，其中附著組分是包含序列RGD的肽。

20.如權利要求16所述的方法，其中附著組分是包含序列IKVAV的肽。

21.如權利要求16所述的方法，其中電流約25kV。

22.一種修復需要治療的受試者的損傷組織的方法，方法包括：

制備如權利要求16所述的載體；

將干細胞接種在載體上并進行增殖；和

將具有增殖的干細胞的載體注射進需要治療的受試者的損傷組織中；

其中所注射的載體促進組織的再生。

23.如權利要求22所述的方法，其中損傷組織是創傷性腦損傷。