[發明專利]烷烴的重組合成

在審

• 申請號: 201480017890.5
• 申請日: 2014-01-27
• 公開（公告）號: CN105164248A
• 公開（公告）日: 2015-12-16
• 發明（設計）人: F·A·斯克瑞利;M·康納;李寧
• 申請（專利權）人: 焦耳無限科技公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 陳文平;徐志明

相關申請的交叉引用

本申請涉及2013年1月25日提交的美國臨時專利申請61/756,973號和2013年5月23日提交的美國臨時專利申請61/826,637號；其均出于全部目的而通過引用在此全文并入。

序列表

本發明包含經由EFS-Web提交的序列表，且其通過引用在此全文并入。所述ASCII拷貝創建于20XX年XX月，命名為XXXXXUS_sequencelisting.txt，大小為X,XXX,XXX字節。

背景技術

許多現有的光能自養生物(即，植物、藻類和光合細菌)不適合工業化生物處理，且因此沒有顯現出商業上的可行性。已經對重組光合微生物進行工程化來以超過該生物體天然產生的水平的量生產烴類和醇類。

發明內容

本文描述了工程化微生物，其中所述工程化微生物包含編碼一種或多種酶的一種或多種重組基因，所述一種或多種酶具有催化烷烴產生的酶活性，其中所述酶活性包括：烷烴脫甲酰單加氧酶活性、硫酯酶活性、羧酸還原酶活性和磷酸泛酰巰基乙胺基(phosphopanthetheinyl)轉移酶活性；烷烴脫甲酰單加氧酶活性、硫酯酶活性、長鏈脂肪酸CoA-連接酶活性和長鏈酰基-CoA還原酶活性；和/或烷烴脫甲酰單加氧酶活性、丙酮酸脫羧酶活性和2-酮酸脫羧酶活性。

在一些方面，酶包括烷烴脫甲酰單加氧酶、硫酯酶、羧酸還原酶和磷酸泛酰巰基乙胺基轉移酶。在一些方面，烷烴脫甲酰單加氧酶具有EC編號4.1.99.5，硫酯酶具有EC編號3.1.2.14，羧酸還原酶具有EC編號1.2.99.6，和磷酸泛酰巰基乙胺基轉移酶具有EC編號2.7.8.7。在一些方面，烷烴脫甲酰單加氧酶由adm編碼，硫酯酶由fatB或fatB2編碼，羧酸還原酶由carB編碼，和磷酸泛酰巰基乙胺基轉移酶由entD編碼。

在一些方面，具有烷烴脫甲酰單加氧酶活性的酶具有EC編號4.1.99.5。在一些方面，具有硫酯酶活性的酶具有EC編號3.1.2.14。在一些方面，具有羧酸還原酶活性的酶具有EC編號1.2.99.6。在一些方面，具有磷酸泛酰巰基乙胺基轉移酶活性的酶具有EC編號2.7.8.7。

在一些方面，酶包括烷烴脫甲酰單加氧酶、硫酯酶、長鏈脂肪酸CoA-連接酶和長鏈酰基-CoA還原酶。在一些方面，烷烴脫甲酰單加氧酶具有EC編號4.1.99.5、硫酯酶具有EC編號3.1.2.14、長鏈脂肪酸CoA-連接酶具有EC編號6.2.1.3和長鏈酰基-CoA還原酶具有EC編號1.2.1.50。在一些方面，烷烴脫甲酰單加氧酶由adm編碼，硫酯酶由fatB或fatB2編碼，長鏈脂肪酸CoA-連接酶由fadD編碼，和長鏈酰基-CoA還原酶由acrM編碼。

在一些方面，具有烷烴脫甲酰單加氧酶活性的酶具有EC編號4.1.99.5。在一些方面，具有硫酯酶活性的酶具有EC編號3.1.2.14。在一些方面，具有長鏈脂肪酸CoA-連接酶活性的酶具有EC編號6.2.1.3。在一些方面，具有長鏈酰基-CoA還原酶活性的酶具有EC編號1.2.1.50。

在一些方面，一種或多種重組基因包含編碼催化酰基-ACP轉化為脂肪酸的硫酯酶的重組基因。在一些方面，一種或多種重組基因包含編碼使由羧酸還原酶基因編碼的蛋白質的ACP部分磷酸泛酰巰基乙胺基化(phosphopatetheinylate)的磷酸泛酰巰基乙胺基轉移酶的重組基因。在一些方面，一種或多種重組基因包含編碼催化脂肪酸轉化為脂肪醛的羧酸還原酶的重組基因。在一些方面，一種或多種重組基因包含編碼催化脂肪醛轉化為烷烴或烯烴的烷烴脫甲酰單加氧酶的重組基因。在一些方面，一種或多種重組基因包含編碼催化脂肪酸轉化為酰基-CoA的脂肪酸CoA-連接酶的重組基因。在一些方面，一種或多種重組基因包含編碼催化酰基-CoA轉化為脂肪醛的酰基-CoA還原酶的重組基因。

在一些方面，酶包括烷烴脫甲酰單加氧酶、丙酮酸脫羧酶和2-酮酸脫羧酶。

在一些方面，所述微生物是細菌。在一些方面，所述微生物是革蘭氏陰性細菌。在一些方面，所述微生物是大腸桿菌。