[發明專利]分析方法

在審

• 申請號: 201480016864.0
• 申請日: 2014-01-31
• 公開（公告）號: CN105074447A
• 公開（公告）日: 2015-11-18
• 發明（設計）人: 木下英樹;鵜沼豐;近藤格
• 申請（專利權）人: 夏普株式會社;國立研究開發法人國立癌癥研究中心
• 主分類號: G01N27/447
• 分類號: G01N27/447
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 齊秀鳳

技術領域

本發明涉及一種分析方法。

本申請基于2013年3月29日在日本申請的日本特愿2013-071753號主張優先權，在這里引用其內容。

背景技術

作為窮盡性地分析直接支持生物活動的蛋白質的方法，近年來正在積極地進行蛋白質組分析。所謂蛋白質組，是在特定的細胞、器官及臟器中生產的全部蛋白質。作為其中的一個技術的二維電泳法由于分辨率高、可以一次檢測出數千種的蛋白質，因此被作為蛋白質等生物體樣品的分離方法大量使用。在二維電泳中，基于蛋白質的物理性質，在被利用等電點電泳分離后，再被利用SDS-PAGE在分子量方向上分離。等電點電泳是對凝膠施加電壓、利用蛋白質的等電點的差別進行分離的方法。另外，在借助SDS-PAGE的分離中，廣泛地利用在作為陰離子系表面活性劑的十二烷基硫酸鈉(SDS)與蛋白質形成復合體的狀態下進行電泳的SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)。

利用二維電泳在平板上的聚丙烯酰胺凝膠內將蛋白質作為點檢出。另外，作為鑒定各蛋白質點的蛋白質的技術，有肽質量指紋圖譜法，通過使用該方法可以確定點內的各蛋白質的種類。即使是將被分離的凝膠中的點轉印到膜上，對于膜中的點，該方法也可以同樣地鑒定蛋白質。

肽質量指紋圖譜法中，將各蛋白質的點以凝膠的狀態切取，將該柱塞狀的凝膠移入液體狀的緩沖液不會泄漏的腔室中。然后，在利用胰蛋白酶處理緩沖液進行置換后，利用胰蛋白酶等蛋白質消化酶將凝膠內的蛋白質消化成肽。此后，對從凝膠中溶出的肽使用質譜分析裝置進行質譜分析，對預先在數據庫上等由估計的蛋白質預想的肽片段的質譜、和實測的質譜的圖案進行比較對照，鑒定消化前的蛋白質。

作為點或條帶的切取方法，已知有使用剃刀、手術刀等刀具或移液吸頭、以及用筒狀的器具自動地切割的裝置等切下的方法(參照專利文獻1)。另外，還已知有切取含有利用二維電泳分離出的蛋白質的凝膠的一塊、并將凝膠中的蛋白質消化成肽的方法(參照非專利文獻1)。

上述各方法是分析被分離出的生物體樣品的一部分的方法，然而還已知有將凝膠劃分為多個的方法。非專利文獻2中，公開有在溶液中劃分利用等電點電泳分離出的蛋白質的方法、通過利用SDS-PAGE使分離出的蛋白質向溶液中溶出而劃分的方法。這些被劃分的蛋白質是僅利用蛋白質的一個物理性質劃分的。由此，僅基于實際的分子量或等電點而被劃分。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1：日本特開2007-209360號公報

非專利文獻

非專利文獻1：PNASvol.97，NO.17，15Aug.2000，9390-9395

非專利文獻2：Naturevol.480，8Dec.2011，p254

發明內容

發明所要解決的問題

然而，非專利文獻2中記載的方法中，由于進行僅基于分子量的劃分、或僅基于等電點的劃分，因此會有無法獲得有關蛋白質等對象物體的足夠的信息的情況。即，由于在僅基于分子量的劃分中不包含等電點偏移信息，因此蛋白質翻譯后的修飾信息模糊。另外，在僅基于等電點劃分的情況下，由加工過程或糖鏈加成等造成的質量方向的變動不明。非專利文獻1中記載的方法中，由于切取了1塊，因此也無法獲得相同的蛋白質的加工過程的信息。

本發明是考慮到此種情況而完成的，其目的之一在于，在具有特定的等電點區域和分子量區域的同時，使用質譜分析儀高靈敏度地檢出利用二維電泳分離出的對象物體。

用于解決問題的方法

本發明的一個方式提供一種分析方法，包括：使對象物體在等電點方向、和與該等電點方向大致正交的分子量方向上進行二維電泳的步驟；將含有進行了所述二維電泳的對象物體的介質用沿著所述等電點方向的分割面和沿著所述分子量方向的分割面分割為格子狀的步驟；和在分割后的所述介質間比較所述對象物體的步驟。

發明效果

根據本發明的一個方式，可以在具有特定的等電點區域和分子量區域的同時，使用質譜分析儀高靈敏度地檢出利用二維電泳分離出的對象物體。

附圖說明

圖1是表示第1實施方式的分析方法的流程的流程圖的一例。

圖2是表示IPG膠條1的外觀形狀的一例的圖。

圖3是表示等電點電泳裝置10的構成的一例的圖。

圖4是關于第二維電泳裝置30的一部分的立體圖、及其A-A線處的剖面圖。

圖5是表示向第二維電泳裝置30中導入了IPG膠條1的樣子的圖。