[發(fā)明專利]包括簡化的基因工程生物指示劑的滅菌指示器

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201480015809.X
• 申請日: 2014-02-24
• 公開（公告）號: CN105143452A
• 公開（公告）日: 2015-12-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 菲利普·P·弗蘭契什科維奇;特里西婭·A·克雷格;W·A·依拉瓦
• 申請（專利權(quán)）人: 美國消毒公司
• 主分類號: C12N15/75
• 分類號: C12N15/75;C12Q1/22;G01N33/52
• 代理公司: 隆天知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 72003
• 代理人: 吳小瑛;張福根

背景技術(shù)

本申請發(fā)明人以前公開一種基因工程生物指示劑，所述基因工程生物指示劑包含用于產(chǎn)生指示酶的至少一種測試生物體和至少一種報告基因，所述報告基因被測試生物體攝取(takenup)，所述測試生物體包含細菌芽孢；至少一種阻遏基因，其抑制報告基因的表達，直至報告基因暴露于至少一種誘導物；其中基因工程生物指示劑是自含式生物指示器的一個組分，所述自含式生物指示器例如兩隔室系統(tǒng)如瓶(vial)和封蓋的組合，該兩隔室系統(tǒng)還包含基因工程生物指示劑的生長培養(yǎng)基。參見例如U.S.專利號8,372,624。

在US8372624公開的基因工程生物指示劑系統(tǒng)和方法中，阻遏基因抑制報告基因的表達，直至該系統(tǒng)暴露于誘導物。在應用這種系統(tǒng)和方法時，遇到了各種問題，包括指示劑的變色，這是由于誘導物和/或與如報告基因一樣必須被測試生物體攝取的阻遏基因有關(guān)的組織的降解造成的。例如，當系統(tǒng)在滅菌處理期間或者在生產(chǎn)基因工程生物指示劑系統(tǒng)的加工過程中被加熱時，已觀測到變色反應。認為通過加熱或其他滅菌處理(例如，通過氧化滅菌處理，如氣態(tài)過氧化氫、環(huán)氧乙烷等)，使誘導物例如木糖降解并變成褐色或者其他變色。這種變褐或變色對檢測與顯示滅菌失敗的結(jié)果相關(guān)的任何變化造成干擾。可以理解，這是不期望的，因為這導致試驗靈敏度降低。以前需要誘導物來克服阻遏基因的影響。通過省略阻遏基因，就不再需要使用誘導物，并因此可以避免由誘導物引起的變褐或變色問題。另外，將認識到在用于誘導測試生物體攝取報告基因的載體中必須包括阻遏基因只會增加用于生產(chǎn)基因工程生物指示劑系統(tǒng)的總體過程的復雜性。這些問題仍需要解決。

發(fā)明概述

因此，在利用這種系統(tǒng)時出現(xiàn)了問題，本申請發(fā)明人通過開發(fā)本發(fā)明解決了這個問題。本申請發(fā)明人已經(jīng)開發(fā)了一種新的基因工程生物指示劑，如同先前的系統(tǒng)，其包括：用于產(chǎn)生指示酶的至少一種測試生物體和至少一種報告基因，報告基因被測試生物體攝取，測試生物體包含細菌芽孢；其中基因工程生物指示劑是自含式生物指示器的一個組分。然而，本發(fā)明不需要阻遏基因和誘導物，并且在事實上不包括阻遏基因和誘導物，而阻遏基因和誘導物是在US8372624中公開的基因工程生物指示劑系統(tǒng)和方法所需的。

因此，根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，提供了一種滅菌指示器，其包括：

第一隔室，其含有基因工程生物指示劑，該第一隔室被調(diào)整適于允許生物指示劑在滅菌過程中與滅菌介質(zhì)接觸；和

第二隔室，其含有至少一種酶底物，該第二隔室被調(diào)整適于使酶底物在滅菌過程中保持與生物指示劑分開，并且該第二隔室被調(diào)整適于在生物指示劑已暴露于滅菌介質(zhì)后允許酶底物接觸生物指示劑；

其中，基因工程生物指示劑包含適合產(chǎn)生指示酶的至少一種測試生物體和至少一種報告基因，所述報告基因被測試生物體攝取；

其中，滅菌指示器中的測試生物體不含任何活性的或者可激活的阻遏基因，該阻遏基因如果存在于測試生物體或滅菌指示器中將抑制報告基因的表達，并且

其中，選擇指示酶和酶底物以使指示酶對酶底物的酶促作用產(chǎn)生可檢測的信號。

在一個實施方案中，使用至少一種質(zhì)粒和/或至少一種病毒，使報告基因被測試生物體攝取。

在一個實施方案中，測試生物體包括嗜熱脂肪地芽孢桿菌(Geobacillusstearothermophilus)和/或萎縮芽孢桿菌(Bacillusatrophaeus)的芽孢。

在一個實施方案中，報告基因包括lacZ、bgaB、xylE、cat或者其中的兩種或更多種的混合物。

在一個實施方案中，指示酶包括β-D-半乳糖苷酶、β-D-葡糖苷酶、α-D-葡糖苷酶、堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、丁酸酯酶、辛酸酯酶脂肪酶、氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶、兒茶酚-2,3-二加氧酶、肉豆蔻酸酯脂肪酶、亮氨酸氨肽酶、纈氨酸氨肽酶、糜蛋白酶、磷酸水解酶、α-D-半乳糖苷酶、α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶、N-乙酰基-β-氨基葡糖苷酶、β-D-纖維二糖糖苷酶、丙氨酸氨肽酶、脯氨酸氨肽酶、酪氨酸氨肽酶、苯丙氨酸氨肽酶、β-D-葡糖醛酸糖苷酶、脂肪酸酯酶，或者其中的兩種或更多種的混合物。

在一個實施方案中，報告基因包括lacZ或bgaB，且指示酶包括β-D-半乳糖苷酶。

在一個實施方案中，質(zhì)粒包含報告基因且不含任何阻遏基因。