[發明專利]用于在酵母和其它轉化細胞中高產量表達多肽的溫度變動法

有效

• 申請號: 201480014647.8
• 申請日: 2014-03-17
• 公開（公告）號: CN105121652B
• 公開（公告）日: 2020-07-28
• 發明（設計）人: G·萊斯尼基;P·D·麥克內爾;F·哈特內爾;M·楊
• 申請（專利權）人: 奧爾德生物制藥公司
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 孫式洪

1.一種產生所需全長抗體的方法，其包括：

(a)在第一溫度下培養包含一個或多個基因的巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)細胞，所述一個或多個基因提供所述所需抗體的表達；以及

(b)在第二溫度下培養真核細胞，并且允許所述巴斯德畢赤酵母細胞產生所需抗體；

其中(i)編碼所需抗體的基因的表達不是受到溫度可誘導型的啟動子的調控，和(ii)所述第一溫度是介于27.5℃與28.5℃之間，所述第二溫度是介于30℃與31℃之間。

2.如權利要求1所述的方法，其中所述所需抗體包含人類抗體或人源化抗體，任選地對IL-6、TNF-α、CGRP、PCSK9、HGF或NGF具特異性的人源化或人類抗體。

3.如權利要求2述的方法，其中所述所需抗體包含對IL-6、TNF-α、CGRP、PCSK9、HGF或NGF具特異性的人源化或人類抗體。

4.如權利要求1所述的方法，其中所述方法增加所述所需抗體的產量。

5.如權利要求1所述的方法，其中相對于在所述第一溫度與所述第二溫度之間沒有差異的情況下所進行的相同方法，所述方法減低一個或多個產物相關抗體變體的相對豐度。

6.如權利要求1所述的方法，其中相對于在所述第一溫度與所述第二溫度之間沒有差異的情況下所進行的相同方法，所述方法減低具有高于或低于所述所需多亞基復合體的表觀分子量的產物相關抗體變體的相對豐度，所述表觀分子量是通過尺寸排阻色譜法或凝膠電泳來檢測。

7.如權利要求1所述的方法，其中相對于在所述第一溫度與所述第二溫度之間沒有差異的情況下所進行的相同方法，所述方法減低具有異常二硫鍵的抗體復合體的相對豐度。

8.如權利要求1所述的方法，其中相對于在所述第一溫度與所述第二溫度之間沒有差異的情況下所進行的相同方法，所述方法減低具有減少的半胱氨酸的抗體復合體的相對豐度。

9.如權利要求1所述的方法，其中相對于在所述第一溫度與所述第二溫度之間沒有差異的情況下所進行的相同方法，所述方法減低具有異常糖基化的抗體復合體的相對豐度。

10.如權利要求1所述的方法，其中相對于在所述第一溫度與所述第二溫度之間沒有差異的情況下所進行的相同方法，所述方法減低一個或多個產物相關抗體變體的相對豐度。

11.如權利要求1所述的方法，其中將提供所述所需抗體的表達的所述基因整合至所述巴斯德畢赤酵母宿主細胞的一個或多個基因組基因座中，其中任選地，所述基因組基因座中的至少一者選自以下項：pGAP基因座、3’AOX TT基因座；PpURA5；OCH1；AOX1；HIS4；GAP；pGAP；3’AOX TT；ARG；以及HIS4 TT基因座。

12.如權利要求1所述的方法，其中編碼所述所需抗體的亞基的基因中的至少一者在可誘導型或組成型啟動子的控制下得以表達，其前提條件是所述可誘導型啟動子不是溫度誘導型的，并且其任選地選自以下項：AOX1、CUP1、四環素可誘導型啟動子、硫胺素可誘導型啟動子，以及FLD1啟動子。

13.如權利要求1所述的方法，其中步驟(a)包括在包含甘油作為碳源的培養基中培養所述巴斯德畢赤酵母細胞，直到所述甘油耗盡為止。