[發明專利]多肽的修飾

有效

• 申請號: 201480014384.0
• 申請日: 2014-03-14
• 公開（公告）號: CN105189747B
• 公開（公告）日: 2019-03-08
• 發明（設計）人: C·斯泰斯;E·沃克
• 申請（專利權）人: 拜斯科阿迪有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京戈程知識產權代理有限公司 11314
• 代理人: 程偉

本發明提供一種在離子交換樹脂上進行的用于將展示于遺傳展示系統的肽綴合于分子支架的方法。

技術領域

本發明涉及生產具有期望的結合活性的多肽配體的方法。特別地，本發明涉及多肽的生產，所述多肽共價結合于分子支架，從而兩個或更多肽環在支架的附著點之間相對。分子支架與多肽的附著在純化樹脂上進行，純化樹脂可以為磁性樹脂珠粒的形式。

背景技術

環肽能夠以高親和性結合并特異性地靶向蛋白靶標，因而是用于治療開發的有吸引力的分子類型。實際上，數個環肽已經成功用于臨床，例如，抗菌肽萬古霉素，免疫抑制藥物環孢霉素或抗癌藥物奧曲肽(ocreotide)(Driggers等人，Nat Rev Drug Discov 2008，7(7)，608-24)。良好的結合特性來自肽和靶標之間形成的相對大的相互作用表面，以及降低的環狀結構構象柔性。通常，大環結合數百平方埃的表面，例如，環肽CXCR4拮抗劑CVX15(；Wu,B.等人，Science 330(6007)，1066-71)，結合整合素αVb3的具有Arg-Gly-Asp基序的環肽()(Xiong,J.P.等人，Science 2002，296(5565)，151-5)、或結合尿激酶型纖溶酶原激活物的環肽抑制劑upain-1(；Zhao,G.等人,J Struct Biol 2007,160(1),1-10)。

由于其環狀構型，大環肽比線性肽柔性低，導致了在結合靶標時熵損失較少，得到了較高的結合親和性。降低的柔性還導致鎖定靶標特異性構象，與線性肽相比增加了結合特異性。該效果已經被基質金屬蛋白酶8(MMP-8)有效的選擇性抑制劑例證了，其中當所述抑制劑的環打開時，失去了對其他MMP的選擇性(Cherney,R.J.等人，J Med Chem 1998，41(11)，1749-51)。通過大環化實現的有利的結合特性，甚至在具有一個以上肽環的多環肽中更顯著，例如，在萬古霉素、乳酸鏈球菌肽(nisin)或放線菌素中。

之前不同的研究小組將帶有半胱氨酸殘基的多肽連接至合成的分子結構上(Kemp,D.S和McNamara,P.E.,J.Org.Chem,1985；Timmerman,P.等人，ChemBioChem,2005)。Meloen和合作者使用三(溴甲基)苯和相關分子將多個肽環快速且定量地環化至合成的支架上，用于蛋白表面的結構化模擬(Timmerman,P.等人，ChemBioChem,2005)。生成候選藥物化合物的方法公開于WO2004/077062和WO2006/078161中，其中通過將含有半胱氨酸的多肽連接至例如三(溴甲基)苯的分子支架生成所述化合物。

WO2004/077062公開了選擇候選藥物化合物的方法。特別地，該文獻公開了包括第一和第二反應基團的各種支架分子，以及使所述支架與另外的分子接觸，來在偶聯反應中在支架和另外的分子之間形成至少兩個連接。

WO2006/078161公開了結合化合物、免疫原性化合物和模擬肽。該文獻公開了來自現有蛋白的肽的各種集合的人工合成。之后將這些肽與恒定的合成肽組合以生成組合文庫，其中恒定的合成肽具有某些引入的氨基酸改變。通過由化學連接將這種多樣性引入來區分以各種氨基酸改變為特征的肽，為發現期望的結合活性提供了增加的機會。該文獻的附圖1顯示了各種環肽構建體的合成的示意圖。該文獻中公開的構建體依賴-SH功能化肽，典型地包含半胱氨酸殘基，和支架上的雜芳基，典型地包含芐基鹵素取代基如二-或三-溴苯基苯。這樣的基團發生反應，在肽和支架之間形成硫醚連接。