[發(fā)明專利]促進(jìn)干細(xì)胞分化為肝細(xì)胞的化合物

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201480012330.0
• 申請日: 2014-03-12
• 公開（公告）號: CN105051023B
• 公開（公告）日: 2017-08-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: E·喬;M·M·哈密爾頓;S·卡米歐卡;B·倫納德;M·特里耶特尼
• 申請（專利權(quán)）人: 豪夫邁·羅氏有限公司
• 主分類號: C07D401/04
• 分類號: C07D401/04
• 代理公司: 北京市中咨律師事務(wù)所11247
• 代理人: 隋曉平,黃革生

本發(fā)明涉及使干細(xì)胞分化為更成熟化(adult-like)的肝細(xì)胞的化合物、其生產(chǎn)方法以及含有它們的藥用組合物。

在藥物研發(fā)過程中，十分需要體外培養(yǎng)方法(robust in vitro methods)用于肝功能的建模。現(xiàn)有的采用人類原肝細(xì)胞培養(yǎng)物的方法具有眾所周知的不足之處，即捐贈者與捐贈者間的變化性和功能上的不穩(wěn)定性。同樣地，肝癌細(xì)胞系顯示了機(jī)能上的不足，而且也存在腫瘤細(xì)胞系中固有的混雜遺傳異常。

盡管多功能干細(xì)胞衍生的組織有希望解決捐贈者與捐贈者間變化性的問題，然而迄今為止大多數(shù)檢測人類誘導(dǎo)性多功能干細(xì)胞(hiPSC)衍生性肝細(xì)胞的報告都顯示，這些細(xì)胞相對于成人組織來說與胎兒組織更為相似，這可能會使得將其外推到成人體內(nèi)的情況更加困難。因此，需要更好的辦法使干細(xì)胞分化為更成熟或成人化的肝細(xì)胞，以生成用于藥物發(fā)現(xiàn)、藥物功效和安全測試的更相關(guān)的模型。

使hIPSC成功分化為成人化的肝細(xì)胞將促進(jìn)用于治療慢性肝病的藥物發(fā)現(xiàn)工作，此類肝病例如肝炎B病毒(HBV)感染。慢性的HBV(CHB)感染在全世界影響了約3.5億人口，存在巨大的未被滿足的醫(yī)療需求。現(xiàn)有的療法核苷抑制劑和干擾素(IFN)對清除病毒不起作用，并且會產(chǎn)生病毒抗藥性和/或不良副作用。基于此類病毒基因組序列的變化性，將HBV分為7種基因型(基因型A–H；A–D為主要基因型)。HBV感染疾病的結(jié)果取決于年齡和基因型。因此，大多數(shù)CHB感染起因于垂直(母到嬰)傳遞和/或童年感染。與之不同的是，～90％接觸病毒的成年人能夠在6個月內(nèi)清除HBV感染。此外，各種臨床數(shù)據(jù)顯示病毒基因型影響HBV疾病的進(jìn)程和對IFN療法的應(yīng)答。也同樣已知，HBV能夠通過各種機(jī)制避開宿主免疫反應(yīng)，此類機(jī)制包括下調(diào)干擾素刺激基因(ISGs)。對于HBV和宿主先天免疫間復(fù)雜的相互作用的更好的理解可能導(dǎo)致產(chǎn)生治療CHB感染的新的宿主/病毒靶點(diǎn)。然而，探索新的、更加有效的HBV抗病毒藥的工作被生理學(xué)健全的體外培養(yǎng)系統(tǒng)的缺乏所阻礙。用作生產(chǎn)物(producer)和靶細(xì)胞的現(xiàn)有的基于肝癌的系統(tǒng)既不是健全的，也不能包括HBV基因型的多樣性。因此，極度需要新的體外系統(tǒng)，這種系統(tǒng)需要在生理學(xué)上更相關(guān)并且支持(support)所有HBV主要基因型的強(qiáng)烈感染，優(yōu)選得自臨床隔離群。此類系統(tǒng)不僅可以作為藥物篩選平臺，而且還可以作為HBV疾病模型，包括干擾素響應(yīng)基因型依賴性的評價。

因此，仍然需要提高干細(xì)胞–衍生的肝細(xì)胞分化為更成熟的肝細(xì)胞，以支持(support)各種基因型導(dǎo)致的患者的HBV強(qiáng)烈感染(robust infection)，供作為藥物篩選平臺和疾病模型使用。

本發(fā)明涉及式I化合物及其可藥用的鹽和酯：

其中R¹–R¹¹如下文所定義。此外，本發(fā)明涉及制造和使用式I化合物的方法以及含有此類化合物的藥用組合物。式I化合物用于使干細(xì)胞分化為更成熟或成年化的肝細(xì)胞以用作藥物篩選平臺和在疾病模型平臺中使用。

圖1提供了熱圖，顯示在采用多劑量實(shí)施例1化合物處理后整體肝細(xì)胞功能的基因表達(dá)增加。生物熱圖通常用在分子生物學(xué)中，以代表對比一些可比樣本的許多基因的表達(dá)水平(例如不同狀態(tài)的細(xì)胞、不同患者的樣本)，這些樣本獲自cDNA樣本。圖1中，“綠色”表示低表達(dá)，而“紅色”表示高表達(dá)。圖示的每行數(shù)據(jù)是相對的，生成從最低表達(dá)水平(綠色)到中等水平(黑色)再到最高表達(dá)水平(紅色)的梯度。

圖2顯示，在采用實(shí)施例1–7化合物處理后，基于一組成熟相關(guān)基因的基因表達(dá)，在誘導(dǎo)性多功能干細(xì)胞衍生的肝細(xì)胞中，各種肝細(xì)胞功能的基因表達(dá)增加。

圖3A和3B顯示iCell肝細(xì)胞中強(qiáng)烈的HBV感染。圖3A為柱狀圖，顯示以實(shí)施例1化合物處理的誘導(dǎo)性多功能干細(xì)胞衍生的肝細(xì)胞引起細(xì)胞對HBV感染的敏感性，這種反應(yīng)以劑量依賴的方式出現(xiàn)。圖3B為柱狀圖，顯示病毒感染被干擾素抑制(100IU/ml)。

圖4A到4D顯示iCell肝細(xì)胞中全–基因型的HBV感染，為一系列柱狀圖，顯示以實(shí)施例1化合物處理的誘導(dǎo)性多功能干細(xì)胞衍生的肝細(xì)胞能夠支持全部四種HBV主要的基因型(A–D)的強(qiáng)烈感染。維持強(qiáng)烈病毒感染需要實(shí)施例1化合物的持續(xù)使用。在HBV感染(6d)前采用實(shí)施例1化合物預(yù)處理細(xì)胞6d，或在感染期間預(yù)處理6天。干擾素(IFN)用于顯示HBV感染的特異性。