[發明專利]用于植物基因表達的SB-UBI終止子序列

在審

• 申請號: 201480009302.3
• 申請日: 2014-02-05
• 公開（公告）號: CN104995305A
• 公開（公告）日: 2015-10-21
• 發明（設計）人: S.E.阿比特
• 申請（專利權）人: 先鋒國際良種公司
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H5/00
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 唐華東;李炳愛

本專利申請要求提交于2013年2月18日的美國臨時申請61/765900的權益，其全部內容以引用方式并入本文。

技術領域

本發明涉及植物分子生物學和植物基因工程領域。更具體地，其涉及用于調控植物基因表達的新型植物終止子序列及其應用。

背景技術

植物基因工程近來的進步已打開了工程化植物以具有改善的特性或性狀的新的大門。這些轉基因植物在其基因組中典型地具有重組DNA構建體，其具有可操作地連接至多個調控區的蛋白質編碼區，該調控區使轉基因準確的表達。在轉基因植物中幫助調控基因表達的調控元件的一些例子為啟動子、內含子、終止子、增強子和沉默子。

植物基因工程已發展至將多種性狀導入商業上重要的植物中，也叫基因堆積。這是通過多基因轉化實現的，其中多種基因被轉化以產生可表達復合表型或多種表型的轉基因植物。然而最優化地調節或控制每種轉基因的表達是重要的。調控元件需要為多樣的以避免引入相同的轉基因植物重復序列，它們已經與對轉基因表達和穩定性來說不期望的負面效應相關聯(Peremarti等人，(2010)Plant?Mol?Biol?73：363-378；Mette等人，(1999)EMBO?J?18：241-248；Mette等人，(2000)EMBO?J?19：5194-5201；Mourrain等人，(2007)Planta?225：365-379，美國專利7632982，美國專利7491813，美國專利7674950，PCT專利申請PCT/US2009/046968)。因此，發現和表征能被用于在重要的農作物物種中表達異源性核酸的新型調控元件是重要的。各種不同的調控區能夠被用于最優化地控制每種轉基因的表達。

調控序列位于編碼區的下游，編碼區包含用于轉錄終止和3′mRNA加工的所需信號，并被稱為終止子序列。該終止子序列在mRNA加工、定位、穩定性和翻譯中起關鍵作用(Proudfoot，N.(2004)Curr.Op.Cell?Biol?16：272-278.；Gilmartin，2005)。包含在終止子序列中的3′調控序列能夠影響基因的表達水平。已經發現植物細胞中嵌合基因的優化表達依賴于合適的3′序列的存在(Ingelbrecht，I.L.W.等人(1989)Plant?Cell?1：671-680)。通過基因的滲漏終止子的通讀轉錄可導致從另一個基因的啟動子的一個轉基因的無益轉錄。轉基因植物中轉基因的雙向、趨同轉錄也可由于分離的趨同基因的滲漏轉錄終止或來自基因組啟動子而發生。趨同、重疊轉錄可降低轉基因表達、或生成反義RNA(Bieri，S.等人(2002)Molecular?Breeding?10：107-117)。這強調了發現新型和高效轉錄終止子的重要性。

發明內容

本發明涉及用于調控植物基因表達的調控序列。具體地，本發明涉及終止子序列。本發明提供了包含終止子序列的重組DNA構建體。

本發明的一個實施例是分離的多核苷酸序列，該分離的多核苷酸包含：(a)如SEQ?ID?NO：1所示的序列；(b)與SEQ?ID?NO：1具有至少95％序列同一性的序列；或(c)包含(a)或(b)的功能性片段的序列，其中所述分離的多核苷酸序列在植物細胞中作為終止子起作用。本發明的另一個實施例是包含分離的多核苷酸序列的重組構建體，該分離的多核苷酸序列包含：(a)如SEQ?ID?NO：1所示的序列；(b)與SEQ?ID?NO：1具有至少95％序列同一性的序列；或(c)包含(a)或(b)的功能性片段的序列，其中該分離的多核苷酸序列在植物細胞中作為終止子起作用。該重組構建體還可包含啟動子和異源多核苷酸，其中啟動子和異源多核苷酸可操作地連接至分離的多核苷酸序列，并且對于所關注的分離的多核苷酸來說是異源的。

本發明的另一個實施例是在植物中表達異源多核苷酸的方法，該方法包括以下步驟：(a)將上文所述的重組DNA構建體導入可再生的植物細胞；(b)從(a)的可再生的植物細胞再生轉基因植物；以及(c)從步驟(b)的轉基因植物獲取子代植物，其中轉基因植物和子代植物包含重組DNA構建體并表現出異源多核苷酸的表達。

在第四實施例中，本發明涉及包含重組DNA構建體的載體、細胞、植物、或種子，該重組DNA構建體包含本發明所述的終止子序列。