[實(shí)用新型]細(xì)胞密度依賴性生長(zhǎng)抑制檢測(cè)裝置

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201420814882.0
• 申請(qǐng)日: 2014-12-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN204325367U
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-05-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張尚立;趙靜;馬劍鋒;彭正華;屈坤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東大學(xué)
• 主分類號(hào): C12M1/34
• 分類號(hào): C12M1/34
• 代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221
• 代理人: 李健康

技術(shù)領(lǐng)域

本實(shí)用新型涉及一種細(xì)胞增殖調(diào)控檢測(cè)裝置，尤其涉及一種細(xì)胞密度依賴性生長(zhǎng)抑制檢測(cè)裝置。

背景技術(shù)

細(xì)胞在生長(zhǎng)過(guò)程中達(dá)到相互接觸時(shí)有停止分裂的現(xiàn)象。由于培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)因子耗盡時(shí)也會(huì)產(chǎn)生生長(zhǎng)抑制，所以正常細(xì)胞因相互接觸而抑制分裂的現(xiàn)象也稱為密度依賴性的生長(zhǎng)抑制(density-dependent?inhibition?of?growth)。在相同條件下培養(yǎng)的惡性細(xì)胞(malignant?cells)對(duì)密度依賴性生長(zhǎng)抑制失去敏感性，因而不會(huì)在形成單層時(shí)停止生長(zhǎng)，而是相互堆積形成多層生長(zhǎng)的聚集體，這種現(xiàn)象也說(shuō)明惡性細(xì)胞的生長(zhǎng)和分裂已經(jīng)失去了控制，調(diào)節(jié)細(xì)胞正常生長(zhǎng)和分裂的信號(hào)對(duì)于惡性細(xì)胞不再起作用。因此，利用專一的檢測(cè)裝置對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的性質(zhì)和類型以動(dòng)態(tài)形式進(jìn)行鑒定，對(duì)正確認(rèn)識(shí)和鑒別正常細(xì)胞和惡性細(xì)胞(癌細(xì)胞)，進(jìn)一步了解細(xì)胞的癌變過(guò)程，即癌癥的發(fā)生機(jī)理，進(jìn)而深入研究探索治療癌癥的方法具有十分重要的意義。

目前，在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中指導(dǎo)學(xué)生認(rèn)識(shí)癌細(xì)胞還只是停留在切片和靜態(tài)的細(xì)胞形態(tài)觀察上，老師給學(xué)生灌輸較為先進(jìn)的理論只能口頭或以模式圖或圖片進(jìn)行，無(wú)法以動(dòng)態(tài)形式展現(xiàn)出來(lái)，對(duì)于利用檢測(cè)裝置，尤其是利用專一的器皿對(duì)細(xì)胞密度依賴性生長(zhǎng)抑制或關(guān)于正常細(xì)胞與惡性腫瘤細(xì)胞的區(qū)別進(jìn)行直觀地展示的裝置還未見(jiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本實(shí)用新型要解決的問(wèn)題是提供一種細(xì)胞密度依賴性生長(zhǎng)抑制檢測(cè)裝置。

本實(shí)用新型所述細(xì)胞密度依賴性生長(zhǎng)抑制檢測(cè)裝置，由培養(yǎng)皿和透明塑料材質(zhì)的積木塊組成；其特征在于：所述積木塊形狀似扇形體，由6～10塊組成，其共同組合后的形狀似圓柱體，且用明膠被固定于培養(yǎng)皿中央?yún)^(qū)域，培養(yǎng)皿中似圓柱體所占面積以外的區(qū)域?yàn)榧?xì)胞培養(yǎng)觀察區(qū)；其中，所述似圓柱體的底面面積為培養(yǎng)皿底面面積的1/2～2/3，高度為培養(yǎng)皿高度的2/3～4/5，所述組成似圓柱體的積木塊有1/2為能解除固定的扇形體，有1/2設(shè)置有自上表面外緣到培養(yǎng)皿底面的斜面，斜面的上表面外緣與培養(yǎng)皿底面有0.5～1.5mm的距離，且斜面的底面與自體上表面外緣連線形成的夾角為15～42度。

上述的細(xì)胞密度依賴性生長(zhǎng)抑制檢測(cè)裝置中：所述組成似圓柱體的積木塊優(yōu)選有1/2為能解除固定的扇形體，有1/2設(shè)置有自上表面外緣到培養(yǎng)皿底面的斜面，且其兩種積木塊間隔排列。(如圖1所示)。

上述的細(xì)胞密度依賴性生長(zhǎng)抑制檢測(cè)裝置中：所述積木塊優(yōu)選由8塊組成，其共同組合后的形狀似圓柱體，且用明膠被固定于培養(yǎng)皿中央?yún)^(qū)域,；其中，有4塊為能解除固定的扇形體，有4塊設(shè)置有自上表面外緣到培養(yǎng)皿底面的斜面，且其兩種積木塊間隔排列，所述4塊有斜面的積木塊分別命名為A、B、C、D，其斜面的底面與自體上表面外緣連線形成的夾角分別為15度、25度、32度、42度。(如圖2所示)。

本實(shí)用新型所述的細(xì)胞密度依賴性生長(zhǎng)抑制檢測(cè)裝置在以動(dòng)態(tài)形式直接觀察待檢實(shí)驗(yàn)細(xì)胞是否存在生長(zhǎng)接觸抑制現(xiàn)象中應(yīng)用。

本實(shí)用新型所述的細(xì)胞密度依賴性生長(zhǎng)抑制檢測(cè)裝置在鑒別正常細(xì)胞與惡性腫瘤細(xì)胞中應(yīng)用。

取貼壁生長(zhǎng)的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)細(xì)胞(血管內(nèi)皮細(xì)胞、肝癌細(xì)胞、胃癌細(xì)胞或胚肺成纖維細(xì)胞)，消化后制成單細(xì)胞懸液，并調(diào)整細(xì)胞濃度為10⁷～10⁸個(gè)/ml，以恰好覆蓋底面量將其加入檢測(cè)裝置中的細(xì)胞培養(yǎng)觀察區(qū)，將上述檢測(cè)裝置蓋好，置于5％C0₂，37℃，100％相對(duì)濕度的培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁，然后再向培養(yǎng)皿中加入培養(yǎng)液，使培養(yǎng)液量為檢測(cè)裝置中似圓柱體高度的2/3，繼續(xù)培養(yǎng)并定時(shí)觀察細(xì)胞培養(yǎng)觀察區(qū)內(nèi)的細(xì)胞生長(zhǎng)，以檢測(cè)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞是否有接觸抑制的情況。

觀察時(shí)，若實(shí)驗(yàn)細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)到匯合狀態(tài)且與皿或圓柱體壁密切接觸后停止生長(zhǎng)，即可初步判定為接觸抑制，再繼續(xù)培養(yǎng)并經(jīng)過(guò)2～5個(gè)細(xì)胞周期，實(shí)驗(yàn)細(xì)胞仍停止分裂，即確定為實(shí)驗(yàn)細(xì)胞出現(xiàn)接觸抑制；反之，在繼續(xù)培養(yǎng)后，實(shí)驗(yàn)細(xì)胞仍能進(jìn)行分裂，且呈現(xiàn)堆積生長(zhǎng)，并能出現(xiàn)跨越有斜面的積木塊斜面上表面外緣并沿斜面生長(zhǎng)現(xiàn)象，則為非接觸抑制。

是否出現(xiàn)非接觸抑制可以間接用于鑒別正常細(xì)胞與惡性腫瘤細(xì)胞。本實(shí)用新型的細(xì)胞密度依賴性生長(zhǎng)抑制檢測(cè)裝置中設(shè)置夾角分別為15度、25度、32度、42度的斜面還可進(jìn)一步用于判定惡性腫瘤細(xì)胞及轉(zhuǎn)化細(xì)胞的增殖強(qiáng)弱。

上述實(shí)驗(yàn)中對(duì)于證實(shí)已出現(xiàn)接觸抑制的實(shí)驗(yàn)細(xì)胞，還可以通過(guò)依次分別拆除固定于培養(yǎng)皿中央?yún)^(qū)域的無(wú)斜面的扇形體積木塊，增加其培養(yǎng)觀察區(qū)的面積，進(jìn)一步進(jìn)行所述實(shí)驗(yàn)細(xì)胞接觸抑制釋放現(xiàn)象的觀察。