[實用新型]一種B型利鈉肽免疫層析半定量檢測試紙

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201420671505.6
• 申請日: 2014-11-12
• 公開（公告）號: CN204188626U
• 公開（公告）日: 2015-03-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 岳曉燕;魏金枝;范曉紅
• 申請（專利權(quán)）人: 正元盛邦（天津）生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74
• 代理公司: 天津濱海科緯知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12211
• 代理人: 李莎

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明創(chuàng)造屬于人B型利鈉肽檢測領(lǐng)域，特別涉及一種采用膠體金免疫層析法對人B型利鈉肽進(jìn)行半定量檢測的試紙。

背景技術(shù)

B型利鈉肽又稱腦尿鈉肽(Brain?natriuretic?peptide，BNP)，是由心肌細(xì)胞合成的具有生物學(xué)活性的天然激素，主要在心室表達(dá)，同時也存在于腦組織中。當(dāng)左心室功能不全時，由于心肌擴(kuò)張而快速合成釋放入血，有助于調(diào)節(jié)心臟功能。心臟功能受損時，BNP不僅分泌的速度快、數(shù)量大，而且對血容量、心臟功能調(diào)節(jié)發(fā)揮重要作用，因此，有人稱BNP為“心臟負(fù)荷應(yīng)急救援分子”。將BNP作為心力衰竭的血漿標(biāo)志物，能夠用于心力衰竭的診斷、嚴(yán)重程度的判斷、治療、預(yù)后評估，指導(dǎo)正確、有效地治療心衰。心肌細(xì)胞所分泌的BNP先以108個氨基酸組成的前體形式存在，當(dāng)心肌細(xì)胞受到刺激時，在活化酶的作用下裂解為由76個氨基酸組成的無活性的直線多肽和32個氨基酸組成的活性環(huán)狀多肽，釋放入血循環(huán)，分別被稱為NT-proBNP和BNP。BNP小于100pg/ml可排除心衰。

BNP和NT-proBNP檢測在本世紀(jì)初先后進(jìn)入我國，十年來已經(jīng)為各級醫(yī)院和醫(yī)師廣泛用于臨床實踐，成為心血管病尤其是心力衰竭診斷十分有用的生物標(biāo)志物。我國2007年《慢性心力衰竭診斷治療指南》和2010年《急性性心力衰竭診斷治療指南》也推薦將NT-proBNP和BNP用于心衰的診斷和預(yù)后判斷。

目前臨床上用于BNP測定的方法以酶聯(lián)免疫法居多。該方法檢測快速，敏感性高，試劑為液體，即開即用，使用方便，開瓶后有效期較長；缺點是試劑一般只能配合專門儀器來使用，費用較高，不利于基層醫(yī)院開展此項檢測。

免疫膠體金技術(shù)是20世紀(jì)70年代初期Faulk和Taylor始創(chuàng)，最初用于免疫電鏡技術(shù)。膠體金標(biāo)記技術(shù)是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物或顯色劑，于抗原抗體反應(yīng)的一種新型免疫標(biāo)記技術(shù)，現(xiàn)在已成功用于電鏡、流式細(xì)胞儀、免疫印跡、蛋白染色、體外診斷制劑的制造等領(lǐng)域。目前金標(biāo)記技術(shù)常與膜載體配合，形成特定的免疫檢測方式，如免疫滲濾試驗和免疫層析試驗等。免疫層析試紙條就是此技術(shù)用于體外快速診測方式的一個重要發(fā)展方向，是在現(xiàn)代單克隆抗體技術(shù)、膠體金免疫層析技術(shù)和新材料技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的新型檢測技術(shù)。近年來該技術(shù)發(fā)展迅速，已經(jīng)在臨床診斷特別是床邊檢測(POCT)中的到了廣泛應(yīng)用，如傳染病、早孕、癌癥等的檢測。免疫膠體金技術(shù)與ELISA技術(shù)同屬于免疫學(xué)診斷方法，均是依賴于抗原與抗體的特異性反應(yīng)，但不需要專門的儀器設(shè)備，更適于現(xiàn)場及床旁快速檢測。

對于床旁檢測(Point?ofCare?testing，POCT)測定BNP而言，因其方便快速地提供可靠的檢驗結(jié)果，能幫助醫(yī)生更早制訂治療策略并節(jié)省治療費用；作為中心實驗室的擴(kuò)展，能夠增加檢測能力并減輕實驗室檢驗人員的壓力；管理人員也能更合理地使用資源。2008ESC心衰診斷治療指南中表明就診時測定BNP濃度低于100ng/L，則該患者慢性心?衰的可能性很小(“排除”截點)；測定BNP濃度高于400ng/L，則該患者慢性心衰的可能較大(“診斷”截點)。如檢測值介于上述兩截點之間(“灰區(qū)”)，可能是程度較輕的慢性心衰或其他，此時應(yīng)結(jié)合其它檢查結(jié)果進(jìn)行進(jìn)一步的鑒別診斷。

目前雖然有一些試劑廠商開發(fā)出了檢測下限為5μg/L，但是都需要配合大型儀器才能進(jìn)行檢測，費時、費力且價格昂貴。且市場上專門針對100ng/L～400ng/L這一臨界范圍的快速檢測產(chǎn)品尚屬空白。因此急需一種能夠?qū)ρ獫{中BNP進(jìn)行半定量檢測的膠體金試紙，提供斷病依據(jù)，以幫助醫(yī)務(wù)工作人員及時準(zhǔn)確的掌握患者病情，降低醫(yī)療風(fēng)險和成本。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明創(chuàng)造提供一種B型利鈉肽免疫層析半定量檢測試紙，能夠高效快速、并且準(zhǔn)確半定量地對BNP進(jìn)行實時檢測，具有十分重要的經(jīng)濟(jì)和社會價值。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明創(chuàng)造采用的技術(shù)方案是，包括硝酸纖維素NC膜，在所述硝酸纖維素NC膜一端依次向上搭接有膠體金墊、樣品墊，在所述硝酸纖維素NC膜另一端向上搭接有吸水紙，所述膠體金墊上含有BNP標(biāo)記抗體以及兔IgG標(biāo)記抗體，所述硝酸纖維素NC膜在沿液體層析方向上依次包被有檢測線(T線)、參比線(R線)以及質(zhì)控線(C線)，所述檢測線為與所述BNP標(biāo)記抗體配對的BNP抗體，所述參比線為羊抗兔二抗，所述質(zhì)控線為羊抗鼠二抗。

其中，所述BNP標(biāo)記抗體為膠體金標(biāo)記的鼠抗人BNP單克隆抗體，檢測線上與其配對的BNP抗體也為鼠抗人BNP單克隆抗體，二者分別識別BNP不同的表位，所述兔IgG標(biāo)記抗體為膠體金標(biāo)記的兔IgG抗體。