[實用新型]氨基末端腦鈉肽前體免疫層析定量檢測試紙條

有效

• 申請號: 201420648424.4
• 申請日: 2014-10-28
• 公開（公告）號: CN204287206U
• 公開（公告）日: 2015-04-22
• 發明（設計）人: 王小明;夏坤;佟順剛
• 申請（專利權）人: 廣州天寶頌原生物科技開發有限公司
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N33/558
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本實用新型屬于免疫檢測領域，具體涉及一種高靈敏度氨基末端腦鈉肽前體免疫層析定量檢測試紙條。

背景技術

腦利鈉肽(BNP)是一種心臟神經激素，當心室壁張力增加時，心室肌細胞受到牽拉刺激，就會以激素原的形式爆發式合成，最后裂解為由32個氨基酸組成的BNP分子與76個氨基酸組成的氨基末端腦鈉肽前體(NT-proBNP)片段，并將2者同時釋放人血循環，發揮生物活性。血清中NT-proBNP分子與BNP分子以1∶1的比例存在于血循環中。BNP及NT-proBNP自其被發現以來即受到廣泛的重視。首先研究者們發現其與心力衰竭有著極為密切的關系，后來又證實其與缺血性心臟病明顯相關，近來許多研究表明其對于其它多種心血管疾病亦有重要價值。我國2007年《慢性心力衰竭診斷治療指南》推薦將BNP和NT-proBNP用于慢性心衰的診斷和預后判斷。

目前檢測氨基末端腦鈉肽前體的常用方法有：

1膠乳凝集法?

膠乳凝集法是臨床較常用的血清學方法，屬于間接的凝集試驗。膠乳試劑用純化的抗人NT-proBNP抗體致敏，能和病人血清中NT-proBNP發生特異性反應，數分鐘內呈現清晰的凝集顆粒，出現凝?集者為陽性，未出現凝集者為陰性。此方法操作簡單、快速，敏感性、特異性較高。但易受補體、類風濕因子(RF)等因素的干擾，產生假陽性結果。因此，為了提高結果的準確性，檢測時應對待測標本進行預處理，以去除干擾因素。

2免疫透射比濁法

免疫透射比濁法是實驗室常用檢測方法。免疫透射比濁法也是一種微量的免疫沉淀測定法。其與速率散射比濁法不同的是以測定透過溶液的光量來反映待測抗原的含量。當光線透過反應體系時，溶液中的抗原抗體免疫復合物可對光線加以吸收和反射，使透射光減少。免疫復合物越多，吸收的光線越多，透射光越少，這種變化可用吸光度表示。若抗體量固定，所測吸光度與免疫復合物的量成正比，也與待測抗原的量成正比。以一系列已知濃度的抗原標準品作對照，即可以測出受檢物含量。

3免疫標記技術?

免疫標記技術用于NT-proBNP測定的免疫標記方法有放射免疫法、酶免疫法、金標免疫法、熒光標記免疫法等。IRNA法靈敏度和特異性高，且不需要分離純化血漿，比RIA法快捷實用，但需要耗時5～36小時，不適合用于自動分析系統，Abbott公司推出的BNP試劑采用雙單克隆抗體、微粒子酶免疫法在Axsym儀上測定，每個小時可以測定56份樣本，Biosite公司的BNP-TRLAGE用于臨床快捷定量檢測，以熒光為標記抗體基礎，一份單獨的樣品只需要15分鐘即可得出結果。

生物素-親和素系統(biotinavidin?system，BAS)，是一種新型生物反應放大系統。隨著各種生物素衍生物的問世，BAS很快被廣泛應用于醫學各領域。將該系統應用于免疫組化，酶聯免疫，熒光免疫，放射免疫等檢測技術中，可顯著地提高以上技術方法的敏感性、特異性和穩定性，使方法更簡便，有助于臨床快速診斷，并利于進行大規模流行病學調查，成為研究免疫反應的有力工具。由于BAS檢測系統經濟快速，又無放射物質污染，不需復雜儀器，充分顯示了此系統的巨大潛力和應用的可能性。

生物素-親和素系統檢測原理：BAS是在常規ELISA原理的基礎上，結合生物素與親和素間的高度放大作用，而建立的一種檢測系統。親和素是卵白蛋白中提取的一種堿性糖蛋白，分子量為68kDa，由4個亞單位組成，對生物素有非常高的親和力(結合常數高達1015M-1)。生物素很易與蛋白質(如抗體等)以共價鍵結合。這樣，結合了酶的親和素分子與結合有特異性抗體的生物素分子產生反應，既起到了多級放大作用，又由于酶在遇到相應底物時的催化作用而呈色，達到檢測未知抗原(或抗體)分子的目的。鏈霉親和素是與親和素有相似生物學特性的一種蛋白質，鏈霉親和素與親和素一樣分子中每條肽鏈都能結合一個生物素，因幾乎所有用于標記的物質均可以同親和素或鏈霉親合素結合。利用生物素-親和素系統研制氨基末端腦鈉肽前體檢測試快速診斷試劑尚無報道。

實用新型內容

本實用新型的目的，在于提供一種氨基末端腦鈉肽前體免疫層析?定量檢測試紙條，其基于雙抗體夾心法、熒光免疫側向層析和生物素-鏈霉親和素放大系統，提供高靈敏度氨基末端腦鈉肽前體免疫層析定量檢測試紙條。使用本實用新型時，提高了檢測靈敏度和檢測穩定性，降低了非特異性結合，檢測時間不大于10分鐘，大大提高了診斷效率。