[實用新型]一種檢測心肌肌鈣蛋白的免疫層析熒光試劑條

有效

• 申請號: 201420608965.4
• 申請日: 2014-10-21
• 公開（公告）號: CN204165983U
• 公開（公告）日: 2015-02-18
• 發明（設計）人: 金晶;杜騰飛;黃力;蘇恩本;王勇;陳偉
• 申請（專利權）人: 南京基蛋生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本實用新型涉及臨床醫學檢驗領域，具體涉及一種檢測心肌肌鈣蛋白的免疫層析熒光試劑條。

背景技術

免疫層析技術是體外診斷試劑的一種方法，具有價格低，檢測方便，檢測快速等特點。它結合了親和技術、標記技術、印記技術和層析技術等技術方法。

目前所用的免疫層析試劑方法學可分為膠體金法和熒光法。熒光技術逐漸在免疫層析中占主導地位。然而該技術具有靈敏度低，檢測時間長，抗體成本高等缺點，進一步提高檢測靈敏度，降低檢測時間，節約抗體用量十分必要。金屬增強是一種利用特殊表面(一般是金屬表面)的表面等離子體振蕩和電磁場剪裁效應,使分布在表面附近的熒光物種的熒光發射強度比自由態的熒光發射強度有顯著增強的現象。專利CN102308211A開發了一種超聲輔助金屬增強熒光增強（MAMEF）的生物分析手段，提高了檢測的靈敏度，間接的節約了成本。然而，CN102308211A主要應用于化學發光方法的生物分析。該方法與干式免疫熒光定量分析法相比價格處于明顯劣勢。目前，市場上還沒有以金屬增強免疫層析熒光原理為指導的體外快速診斷產品。

發明內容

為了克服上述現有技術中的不足，本實用新型所要解決的技術問題是提供一種檢測心肌肌鈣蛋白的免疫層析熒光試劑條，本實用新型應用納米金屬粒子提高熒光強度的原理，使得免疫檢測時間大幅縮短、特異性和靈敏度大幅提高、準確性大幅提高。

本實用新型所采用的技術方案是：一種心肌肌鈣蛋白的免疫層析熒光試劑條，包括底板，其特征在于還包括樣品墊、示蹤粒子結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊；所述樣品墊、示蹤粒子結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，水平方向順序連接并固定于底板上；所述示蹤粒子結合墊設有包被在納米金屬粒子表面的cTnI單克隆抗體/多克隆抗體-熒光顆粒復合物吸附層；所述的硝酸纖維素膜上設置有cTnI單克隆抗體或多克隆抗體捕獲分子構成的檢測線和兔抗鼠IgG抗體構成的質控線。

所述的納米金屬粒子選自納米金顆粒、納米銀顆粒、金納米棒或復合納米粒子，粒徑為50~200nm，包被的抗體厚度為10~30nm。

所述熒光顆粒選自熒光素cy5、熒光素cy7、羧基熒光素、2-甲氧基熒光增強素、羅丹明、藻紅蛋白中的一種。

本實用新型一種檢測心肌肌鈣蛋白的免疫層析熒光試劑條的制備方法是：

1）樣品墊的制備：樣品墊選用玻璃纖維或聚酯材料，用緩沖鹽（PBS，Tris或甘氨酸等）等溶解5mg/ml?的蛋白（BSA，酪蛋白等），然后加入少量的表面活性劑（Tween20等），調節pH到6~8，將璃纖維或聚酯材料置于浸泡2?～?4?小時，取出后25℃干燥8?小時可得；

2）示蹤粒子結合墊的制備：將處理好的樣品墊上均勻的噴上示蹤粒子標記抗體/?抗原標記物，置于25℃干燥4小時即可得，示蹤粒子制備可分抗體IgG-熒光素的制備和金屬粒子-抗體-熒光復合物的制備兩步：

A．抗體IgG-熒光素的制備：抗體IgG溶解于20~100Mmol的PBS緩沖液中，活化的熒光素（FITC，Cy5等）溶解于二甲基亞砜（DMF）中，然后將抗體IgG與熒光素以1:1~1:3混合，充分攪拌反應1h，然后將溶液置于透析袋中梯度換液透析3次，每次6~8h，得到的溶液即為抗體IgG-熒光素復合物；

B．金屬粒子-抗體-熒光復合物的制備：將納米金屬粒子與抗體IgG-熒光素以10mg:20~100ug比例充分混合均勻后，然后向溶液中加入稀鹽酸調節pH使抗體-熒光素吸附于金屬粒子表面，充分反應后加入NaOH調節pH為7~8，離心除去游離抗體-熒光素，以合適的緩沖液恢復到一定的體積即為示蹤粒子復合物；

3）硝酸纖維素膜的處理：

A．檢測線的制備：將心肌肌鈣蛋白相對應的捕獲單克隆抗體或多克隆抗體用20mmol/L?pH7.2?的PB?緩沖液稀釋到2.0mg/ml?的濃度，0.8ul/cm?在硝酸纖維素膜上劃線得到檢測線6，然后將硝酸纖維素膜4置于干燥箱內20℃鼓風干燥12h即得；

B．質控線的制備：將兔抗鼠IgG?抗體按4mg/ml?的濃度，0.8ul/cm?在硝酸纖維素膜上劃線得質控線7，該線與檢測線6平行，間隔5mm，干燥條件同檢測線6即可制備好質控線7?；4）吸水墊的制備：吸水紙裁剪成30*2.7cm?每條；

5）組裝：塑料底襯，樣品墊和吸水紙為本領域通用的部件。將上述硝酸纖維素膜、吸水墊、樣品墊粘貼在塑料底襯上，將貼好的中間物用斬切機切成一定寬度的試劑條。