[實用新型]用于植物寄生線蟲核酸提取的試劑盒有效

申請?zhí)枺?/td>	201420564019.4	申請日：	2014-09-28
公開（公告）號：	CN204251601U	公開（公告）日：	2015-04-08
發(fā)明（設計）人：	江麗輝;邊勇;鄧叢良;劉若思;鄭春生;駱衛(wèi)峰	申請（專利權）人：	中華人民共和國北京出入境檢驗檢疫局
主分類號：	C12M1/00	分類號：	C12M1/00;C12N15/10
代理公司：	暫無信息	代理人：	暫無信息
地址：	100026***	國省代碼：	北京;11
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摘要：
搜索關鍵詞：	用于植物寄生線蟲核酸提取試劑盒
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【說明書】：

技術領域

本實用新型涉及檢驗檢疫技術，尤其涉及一種用于植物寄生線蟲核酸提取的試劑盒。

背景技術

植物寄生線蟲是一種體型微小，通常肉眼不可見的蠕蟲形動物。傳統(tǒng)分類方法是將線蟲列入線形動物門中線蟲綱。植物寄生線蟲主要通過取食植物根系，造成植物根系畸形、養(yǎng)分吸收困難甚至腐爛，從而影響作物產量。

據(jù)統(tǒng)計，因線蟲危害全球每年糧食和纖維作物損失高達800億美元，歷史上甜菜胞囊線蟲(Heterodera?schachtii)、馬鈴薯金線蟲(Globodera?rostocheinsis)，溫暖地區(qū)的根結線蟲(Meloidogyne?spp)等都引起嚴重的植物線蟲病害。東北和黃淮地區(qū)的大豆胞囊線蟲(Heterodera?glycines)、鱗球莖莖線蟲(Ditylenchus?dipsaci)、水稻干尖線蟲(Aphelenchoides?besseyi)都一直造成生產上的嚴重損失。近年來松材線蟲(Bursaphelenchus?Xylophilus)在江蘇、安徽、廣西、云南等省蔓延引起一些松樹樹種的毀滅性危害。可見，植物寄生線蟲病害一直受到人門的重視，一直以來都是口岸檢驗檢疫工作中，需要檢測的一類植物有害生物。

近年來，隨著分子生物學技術的不斷發(fā)展，多種線蟲分子生物學檢測技術不斷建立，例如：實時熒光PCR技術、RFLP技術和LAMP技術，這些技術均建立在線蟲核酸提取的基礎上，但目前大多數(shù)線蟲核酸提取的方法存在諸多問題，諸如提取效率低、不穩(wěn)定、包含一些有毒有害物質等，這些問題都影響了對這類有害生物檢測方法的建立和應用。因此線蟲核酸的穩(wěn)定提取成為限制這些技術進一步推廣完善的重要因素。國內一些學者也發(fā)表文章開始提供一些線蟲核酸分離的方法，常用的蠕蟲裂解法，對線蟲核酸的裂解提取效果較好，但其操作時間較長，新近一些學者發(fā)表的冷凍-酶解法針對一些體形較大體壁較薄的線蟲種類效果較好，但其基于變溫形成的裂解力效率較低，適用范圍較窄，且穩(wěn)定性較差。

由于線蟲體型微小，肉眼不可見，對其核酸的有效提取和富集是對其進行分子檢測的關鍵?；诩{米富集技術的有害生物核酸提取方法在近幾年發(fā)展迅速，已經在植物病毒、植物真菌、植物細菌等領域出現(xiàn)較多研究和方法的建立，但尚未應用到植物線蟲研究領域。

實用新型內容

有鑒于此，本實用新型的主要目的在于提供一種用于植物寄生線蟲核酸提取的試劑盒，以快捷、高效地提取植物寄生線蟲核酸，并簡化其操作過程。

為達到上述目的，本實用新型的技術方案是這樣實現(xiàn)的：

一種用于植物寄生線蟲核酸提取的試劑盒，包括盒體；該盒體內設有一個9孔磁力架1，用于置放所述9孔磁力架和多瓶試劑的下凹位，以及成型紙盒8和盒內擋板7。

其中，所述9孔磁力架，設有分列兩排的9個圓形孔；具體為：一排設有3個供1.5ml離心管適用的孔；另一排設有6個供0.2ml離心管適用的孔。

所述分列兩排的9個圓形孔之間，設有可上下移動的磁力板11，所述磁力板11通過調節(jié)鈕13沿磁力板調節(jié)道12上下移動。

所述9孔磁力架1，其支架主體由聚乙烯樹脂鑄成。

所述試劑盒進一步包括一個用于存放試劑盒說明書的槽位6。

所述多瓶試劑，具體為：線蟲核酸裂解液2、線蟲核酸富集液3、線蟲核酸洗滌液4和線蟲核酸釋放液5。

所述線蟲核酸裂解液2，包含：20mmol/L醋酸鉀，5mmol/L乙二胺四乙酸，0.3M鹽酸胍，0.2mM檸檬酸鈉，0.1mM硫酸，0.1mM蛋白酶K。

所述線蟲核酸富集液3，主要由粒徑為200nm的磁珠和緩沖液組成，所述緩沖液，具體為：2％PEG2000，0.1mol/L?NaCl，0.001mol/L?KCl，0.01mol/L?Na2HPO4，0.002mol/L?KH2PO4，pH7.2～7.4。