[實用新型]用于農(nóng)桿菌介導的絲狀真菌遺傳轉(zhuǎn)化的剪膜器

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201420517133.1
• 申請日: 2014-09-10
• 公開（公告）號: CN204211750U
• 公開（公告）日: 2015-03-18
• 發(fā)明（設計）人: 梁慎;徐小利;趙衛(wèi)星;常高正;李曉慧;王龍飛;程丹丹
• 申請（專利權(quán)）人: 河南省農(nóng)業(yè)科學院園藝研究所
• 主分類號: C12N15/84
• 分類號: C12N15/84;C12Q1/04
• 代理公司: 河南科技通律師事務所 41123
• 代理人: 樊羿

技術(shù)領(lǐng)域

本實用新型屬于遺傳工程領(lǐng)域，具體涉及一種用于絲狀真菌遺傳轉(zhuǎn)化的剪膜器，尤其應用于農(nóng)桿菌介導的絲狀真菌遺傳轉(zhuǎn)化。

背景技術(shù)

根癌農(nóng)桿菌介導的絲狀真菌遺傳轉(zhuǎn)化是近年建立起來的一種新方法，該方法已經(jīng)成為真菌菌種改良、新基因標記及目的基因篩選、分離和克隆的重要方法之一。與PEG、基因槍等真菌轉(zhuǎn)化體系相比，該遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)具有方法簡單、材料易得、轉(zhuǎn)化效率高以及轉(zhuǎn)化子中T-DNA單拷貝插入比例高等特點，同時，該方法獲得的突變體遺傳穩(wěn)定，T-DNA插入位點克隆非常方便，解決了傳統(tǒng)轉(zhuǎn)化方法的瓶頸。目前，利用該方法已成功實現(xiàn)了多種真菌高通量突變體庫的構(gòu)建，且在各類真菌突變體庫構(gòu)建的基礎上，開展了相關(guān)基因的篩選和功能基因的研究。隨著不同絲狀真菌遺傳研究的進行，農(nóng)桿菌介導的真菌轉(zhuǎn)化會得到更加廣泛的應用。

絲狀真菌遺傳轉(zhuǎn)化一般要經(jīng)過以下幾個步驟：農(nóng)桿菌活化及其誘導培養(yǎng)-農(nóng)桿菌與絲狀真菌二者共培養(yǎng)轉(zhuǎn)化-轉(zhuǎn)化子的篩選-轉(zhuǎn)化子獲得與鑒定。其中，轉(zhuǎn)化子的篩選是獲得轉(zhuǎn)化子極其重要的一個環(huán)節(jié)，這一步驟的效率，直接影響著轉(zhuǎn)化子的數(shù)量和質(zhì)量，從而決定著下一步研究。真菌屬于微生物，在一張轉(zhuǎn)化膜上轉(zhuǎn)化效率從幾個到上百個數(shù)量不等，由于轉(zhuǎn)化過程中，T-DNA插入位點的多樣性、T-DNA插入時間差異等，決定著突變體之間生長、發(fā)育和物質(zhì)能量代謝的差異，同時，有些絲狀真菌在營養(yǎng)生長的同時，進行著生殖作用，就會產(chǎn)生孢子等繁殖體，這些繁殖體具有穩(wěn)定的抗性，因此，這一步驟的處理效率、處理質(zhì)量決定著獲得轉(zhuǎn)化子的多少及其轉(zhuǎn)化子的有效性。

目前，農(nóng)桿菌介導的絲狀真菌遺傳轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)化子的篩選一般是農(nóng)桿菌與絲狀真菌混合物均勻涂布在透性膜玻璃紙或硝酸纖維素膜(稱為轉(zhuǎn)化膜)上，共培養(yǎng)轉(zhuǎn)化48h后，轉(zhuǎn)化膜剪成條狀，均勻地放置到含有相應抗生素篩選平板上。由于這個過程中，一般有兩個人共同操作完成，其中一個人負責剪膜，另一個人負責輔助展開轉(zhuǎn)化膜及其擺放膜條，而且需要用到剪刀、多個鑷子，操作過程會出現(xiàn)多種問題，如下：

1.農(nóng)桿菌介導的絲狀真菌遺傳轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化效率非常高，一張大小約4cm×5cm的膜上，出現(xiàn)幾十個甚至上百個轉(zhuǎn)化子，有的轉(zhuǎn)化子還可能產(chǎn)生孢子等繁殖體，雙人操作，且必須懸空操作，膜的震動性大，多個鑷子剪刀，且較長時間接觸轉(zhuǎn)化膜，容易出現(xiàn)外源污染或交叉污染，導致轉(zhuǎn)化子出現(xiàn)“雙胞胎”和“多胞胎”現(xiàn)象；

2.若是玻璃紙轉(zhuǎn)化膜，由于其含水量較少，在超凈工作臺上，風速相對較大，操作時間較長，玻璃紙容易風干卷曲，風干卷曲的膜，不利于剪膜，同時，卷曲的膜條可能多處懸空不能夠接觸篩選培養(yǎng)基，導致因營養(yǎng)缺乏而轉(zhuǎn)化子無法生長，這直接影響到轉(zhuǎn)化子的獲得，也給轉(zhuǎn)化子的篩選帶來很大的限制；

3.在剪膜過程中，由雙人操作完成，由于膜在懸空進行，穩(wěn)定性差，且滯留時間較長，長時間操作容易疲勞，剪切膜條之間均勻性差，膜條寬窄不一，在篩選培養(yǎng)基上放置不均勻，不能有效利用篩選培養(yǎng)基；

4.費工費時，效率低下。目前進行農(nóng)桿菌介導的絲狀真菌遺傳轉(zhuǎn)化，共培養(yǎng)后進行轉(zhuǎn)化子篩選，需要轉(zhuǎn)移在轉(zhuǎn)化膜到一新的篩選培養(yǎng)基上，在此過程中，通常轉(zhuǎn)化膜需要剪切成條狀，這需要雙人合作才能完成，工作效率較低。

因此，探索一種在轉(zhuǎn)化子篩選過程中，有效減少污染、操作方便、高效、有效利用培養(yǎng)皿空間，同時提高轉(zhuǎn)化子收獲的數(shù)量與質(zhì)量的途徑，是絲狀真菌轉(zhuǎn)化子篩選過程中的一種當務之急。

發(fā)明內(nèi)容

針對上述問題，本實用新型提供了一種用于農(nóng)桿菌介導的絲狀真菌遺傳轉(zhuǎn)化的剪膜器，該剪膜器可一人操作、剪切均勻、應用廣泛。

本實用新型技術(shù)方案如下：

設計一種用于農(nóng)桿菌介導的絲狀真菌遺傳轉(zhuǎn)化的剪膜器，包括手持部和刀頭，所述刀頭包括一個由前邊、后邊和刀刃組成的三角形，且前邊與刀刃的夾角為40～50°，后邊與刀刃的夾角為25～35°；所述手持部與所述刀頭的后邊連接，并與所述刀頭的前邊平行設置。

優(yōu)選的，所述刀頭還包括一個柄部，該柄部與后邊固定連接，并與前邊平行設置；所述手持部與該柄部活動連接。

更優(yōu)選的，所述手持部的一端設置有夾持裝置（便于更換刀頭），該夾持裝置與所述柄部活動連接。

更優(yōu)選的，所述夾持裝置為與所述柄部匹配的螺栓緊固裝置。

優(yōu)選的，所述前邊與刀刃的夾角為45°，后邊與刀刃的夾角為30°。

優(yōu)選的，所述手持部與所述刀頭的前邊對齊設置。

優(yōu)選的，所述刀頭為片狀，所述手持部為柱狀。

優(yōu)選的，所述手持部上設置有橡膠或皮制防滑套。

優(yōu)選的，所述刀頭由不銹鋼材料制成。