[實用新型]用于檢測范可尼貧血的試劑盒

有效

• 申請號: 201420430312.1
• 申請日: 2014-07-31
• 公開（公告）號: CN204086280U
• 公開（公告）日: 2015-01-07
• 發明（設計）人: 李悠南;陳欣;熊凱;程宇;梁超;王緒華;陳忠;黃士昂;方國偉
• 申請（專利權）人: 北京海思特臨床檢驗所有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/532
• 代理公司: 北京天奇智新知識產權代理有限公司 11340
• 代理人: 陸軍

技術領域

本實用新型屬于分子生物學技術領域，涉及一種用于檢測范可尼貧血的試劑盒。

背景技術

范可尼貧血(Fanconi?anemia)是一種發生在常染色體或X染色體上的隱性遺傳疾病，由染色體的不穩定性和畸形造成的。經常伴隨發生進行性骨髓衰竭，白血病以及腫瘤等疾病。目前有15個FA基因已被發現，FA蛋白參與一般的DNA修復信號通路以及FA/BRCA信號通路。而在這些信號通路中最重要的一點是在DNA損傷中形成的FANCD2的單泛素化，此泛素化是經由FA上游蛋白(A,B,C,E,F,G,L和M)形成的FA核心蛋白復合體介導組成的大核E3泛素連接酶復合體引導的過程。單泛素化FANCD2和FANCI的異二聚體會與下游的FA蛋白(FANCD1/BRCA2,FANCN/PALB2,FNACJ/BRIP1,FANCP/SLX4,RAD51C,BRAC1)進行反應，在FAN1提供核酸酶活性的條件下參與DNA鏈交聯修復(ICLs)。FA病人經常伴有各樣先天性畸形病，比如身材矮小癥，Fanconi畸形面孔，小眼畸形，拇指與橈骨畸形，皮膚色素沉著過度以及心臟，腎臟，泌尿生殖等畸形。FA病人經常在第一個或第二個10年發展成為骨髓衰竭，但是對于大多數患者來說，疑似FA的診斷往往在全血細胞減少癥狀出來后才得以重視，甚至在有些病人中，直到出現MDS/AML出現后才得以最終確診。胎兒血紅蛋白，血清阿爾法胎兒蛋白和巨紅細胞癥經常在FA中發現，但是他們的缺失并不能確保沒有FA。另外有相當數量的病人盡管不會發展到骨髓衰竭但是仍然有惡化的危險。

測序是目前早期確定范可尼貧血的唯一技術,技術方案是檢測所有范可尼貧血蛋白的基因，提取待檢測者外周血，進行DNA提取，然后上機做測序，測序結果進行比對，找出相關突變與否，來判斷是否為陽性患者。本技術成本昂貴，由于測序儀器本身很貴，數據結果龐大，難于分析，所以造成檢測費用也非常巨大，一般測全要8000以上，就是測定最常見的FANCA,FANCC,FANCG基因突變，也要5,6千元人民幣。第二就是結果分析復雜，由于涉及蛋白數量很大，大量測序結果，耗費工時，并且有些突變難以判斷為有義突變。第三結果的準確性也存在質疑，只能給出參考，除非對典型的突變可以準確外，其他狀況只可作為參考。

所以一個明確簡潔的診斷方法迫在眉睫，而運用western?blot方法檢測FANCD2單泛素化可以確診FANCD2上游以及自身突變所造成的FA，而這已經占了FA總發病率的90％以上，特異性幾乎可達100％。

實用新型內容

為了解決上述技術問題，本實用新型的目的在于提供一種用于檢測范可尼貧血的的試劑盒，可以快速、準確地檢測范可尼貧血。

為實現上述目的，本實用新型采取的技術方案是：一種用于檢測范可尼貧血的試劑盒，包括盒體(1)、盒蓋(3)和設置在盒體(1)內的襯墊(2)，所述襯墊(2)上設有小孔，裝有紅細胞裂解液的試劑管(4)、裝有RIPA細胞裂解液的試劑管(5)、裝有加樣緩沖液的試劑管(6)、裝有glycine?tris/SDS緩沖液的試劑管(7)、裝有glycine?tris轉膜緩沖液的試劑管(8)、裝有抗體IgG1的試劑管(9)、裝有抗體IgG-HRP的試劑管(10)、裝有PBS-tween洗液的試劑管(11)、裝有化學發光液的試劑管(12)、裝有顯影定影液的試劑管(13)、裝有BSA封閉液的試劑管(14)、裝有PBS溶液的試劑管(15)被設置在所述小孔內。

根據本實用新型的實施例，所述試劑盒還包括：裝有去離子水的試劑管(16)。

根據本實用新型的實施例，所述襯墊(2)上設有13個小孔，所述小孔在所述襯墊(2)上分成3排平行排列。

通過以上技術方案，本實用新型的有益效果如下：

第一，FANCD2單泛素化做為范可尼貧血指標有極高的特異性，而westernblot技術可以清楚表明單泛素化的缺失與否以及FANCD2本體蛋白突變與否。結果直觀，判讀容易，特異性極高。

第二，對儀器依賴程度不高，只需要跑垂直蛋白電泳的相關儀器，轉膜相關儀器，顯影相關儀器試劑等可替代簡易儀器，無需核心精密儀器，無需統計軟件，數據分析軟件等。所需儀器成本低廉。

第三，western?blot成本相比同類檢測范可尼貧血技術成本低廉，尤其隨著樣本量的增大，成本大幅度縮小。相比起測序，需要測定幾十個范可尼蛋白基因來說，成本會小很多。

附圖說明

圖1為本實用新型的結構示意圖；