[實(shí)用新型]一種單核細(xì)胞增生性李斯特菌酶聯(lián)免疫檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201420271796.X
• 申請日: 2014-05-26
• 公開（公告）號: CN203941171U
• 公開（公告）日: 2014-11-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉箐;郭慧琴;吳淑燕
• 申請（專利權(quán)）人: 上海理工大學(xué)
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 上海精晟知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31253
• 代理人: 馮子玲

技術(shù)領(lǐng)域

本實(shí)用新型屬于生物技術(shù)和免疫學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測單核細(xì)胞增生性李斯特菌的酶聯(lián)免疫試劑盒。

背景技術(shù)

單核細(xì)胞增生李斯特菌(Listeria?monocytogenes)是一種短小的革蘭氏陽性無芽胞兼性厭氧桿菌，是李斯特菌屬中致病力最強(qiáng)的細(xì)菌，也是唯一對人致病的、典型的胞內(nèi)寄生菌，可以導(dǎo)致嚴(yán)重的人畜共患傳染病，如腦膜炎、敗血癥、流產(chǎn)和單核細(xì)胞增多等癥狀。1988年，世界衛(wèi)生組織(World?Health?Organization，WHO)發(fā)表“食源性李斯特菌病勸告書”，指導(dǎo)全世界各國如何預(yù)防李斯特菌污染和中毒。自此，LM成為新的重要的食源性疾病病原菌，WHO將其與E.coli?O157、沙門氏菌以及金黃色葡萄球菌并列為20世紀(jì)90年代四大食源性致病菌。該菌主要污染牛奶及乳制品、乳酪制品、肉制品香腸、加工禽類、生肉、魚、蝦、煙熏魚、生蔬菜。

目前單核細(xì)胞增生李斯特菌的檢測主要依賴于國標(biāo)所規(guī)定的生化鑒定，其缺點(diǎn)是操作繁瑣、檢測周期較長，無法適應(yīng)大量的樣品篩查。免疫學(xué)檢測是近年來出現(xiàn)的最快速、準(zhǔn)確、穩(wěn)定的快速檢測手段，但是檢測產(chǎn)品全部依賴進(jìn)口，我國目前尚無擁有完全自主知識產(chǎn)權(quán)，且可運(yùn)用于檢測實(shí)踐的快速檢測產(chǎn)品，該專利以單核細(xì)胞增生李斯特菌為檢測靶標(biāo)，所要求保護(hù)的技術(shù)涉及單核細(xì)胞增生性李斯特菌快速檢測產(chǎn)品。

實(shí)用新型內(nèi)容

本實(shí)用新型的目的是提供一種檢測單核細(xì)胞增生性李斯特菌的檢測試劑盒。

具體而言，本實(shí)用新型提供了一種單核細(xì)胞增生性李斯特菌酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，包括盒體，所述盒體內(nèi)設(shè)有自封袋和襯墊，所述自封袋內(nèi)設(shè)有包被了作為捕捉抗體的抗單核細(xì)胞增生性李斯特菌單克隆抗體的酶標(biāo)反應(yīng)板，所述襯墊上設(shè)有數(shù)個(gè)容器孔，所述容器孔內(nèi)分別設(shè)有陽性對照溶液、陰性對照溶液、10×濃縮洗滌液、顯色液、終止液、酶標(biāo)抗體溶液和酶標(biāo)抗體稀釋液，所述酶標(biāo)抗體為辣根過氧化物酶標(biāo)記的作為檢測抗體的抗單核細(xì)胞增生性李斯特菌的單克隆抗體。

在一優(yōu)選例中，所述酶標(biāo)反應(yīng)板由支撐架和設(shè)于支撐架上的可拆卸式微孔條構(gòu)成，所述微孔條上設(shè)有微孔，所述微孔中包被有作為捕捉抗體的抗單核細(xì)胞增生性李斯特菌單克隆抗體。

在另一優(yōu)選例中，所述的作為捕捉抗體的抗單核細(xì)胞增生性李斯特菌單克隆抗體由小鼠雜交瘤細(xì)胞系1B4E7A6C9，CGMCC?No.8765產(chǎn)生，所述作為檢測抗體的抗單核細(xì)胞增生性李斯特菌的單克隆抗體由小鼠雜交瘤細(xì)胞系6D4H7C8B6，CGMCC?No.8002產(chǎn)生。

此外，在本實(shí)用新型的試劑盒中還可包含使用說明書，用于說明其中裝載的試劑的使用方法。

本實(shí)用新型的酶聯(lián)免疫試劑盒的檢測原理及有益效果如下：

本實(shí)用新型的試劑盒采用的是雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法。當(dāng)在酶標(biāo)反應(yīng)板微孔條上預(yù)包被抗單核細(xì)胞增生性李斯特菌單克隆抗體(捕捉抗體)時(shí)，加入樣品溶液或標(biāo)準(zhǔn)品后，再加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗單核細(xì)胞增生性李斯特菌單克隆抗體(檢測抗體)，樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中存在的單核細(xì)胞增生性李斯特菌與酶標(biāo)反應(yīng)板上包被的抗單核細(xì)胞增生性李斯特菌單克隆抗體相結(jié)合，加入檢測抗體后，會(huì)形成“抗體—抗原—酶標(biāo)抗體”復(fù)合物，經(jīng)過TMB(四甲基聯(lián)苯胺)顯色后會(huì)形成黃色物質(zhì)，從而判斷樣品中單核細(xì)胞增生性李斯特菌的存在與否以及存在的量。

用酶標(biāo)儀于450nm下測定吸光度值。陰性對照≤0.1、陽性對照≥0.3，實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效，否則結(jié)果判定為無效；檢測孔OD值≥0.2時(shí)，判定為陽性；檢測孔OD值介于0.1-0.2之間時(shí)，判定為弱陽性；檢測孔OD值≤0.1判定為陰性。

試驗(yàn)表明，本實(shí)用新型的單核細(xì)胞增生性李斯特菌酶聯(lián)免疫試劑盒，有較高的靈敏度和準(zhǔn)確度。板間誤差小于5％，板內(nèi)CV小于3％。與出血性大腸桿菌O157:H7、豬霍亂沙門、鼠傷寒沙門、腸炎沙門、福氏志賀、宋內(nèi)氏志賀、鮑氏志賀、副溶血弧菌、阪崎腸桿菌、小腸耶爾森氏菌、肺炎鏈球菌、蠟樣芽孢桿菌等均無交叉反應(yīng)。

總之，本實(shí)用新型的試劑盒對樣品的前處理要求低，操作簡便，檢測極限為105cfu/ml，特異性和穩(wěn)定性好，并與大多數(shù)食源性致病菌都沒有交叉反應(yīng)。

本實(shí)用新型各個(gè)方面的細(xì)節(jié)將在隨后的章節(jié)中得以詳盡描述。通過下文以及權(quán)利要求的描述，本實(shí)用新型的特點(diǎn)、目的和優(yōu)勢將更為明顯。

附圖說明

圖1是本實(shí)用新型的檢測試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2是本實(shí)用新型的檢測試劑盒的酶標(biāo)反應(yīng)板的示意圖。

附圖標(biāo)記釋義：1.盒體；2.襯墊；3.容器孔；4.微孔板；5.支撐架；6.微孔條；7.微孔。