[實(shí)用新型]一種金黃色葡萄球菌免疫PCR檢測(cè)試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201420173166.9
• 申請(qǐng)日: 2014-04-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN203960209U
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-11-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉箐;吳嫚
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海理工大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12M1/34
• 分類(lèi)號(hào): C12M1/34;C12Q1/68;C12Q1/14;C12R1/445
• 代理公司: 上海精晟知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31253
• 代理人: 馮子玲

技術(shù)領(lǐng)域

本實(shí)用新型屬于生物技術(shù)和免疫學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測(cè)金黃色葡萄球菌的免疫PCR檢測(cè)試劑盒。

背景技術(shù)

金黃色葡萄球菌（Staphylococcus?aureus）是最常見(jiàn)的食源性致病菌，廣泛存在于自然環(huán)境中。金黃色葡萄球菌主要污染奶、肉、蛋、魚(yú)及其制品等動(dòng)物性產(chǎn)品，包括奶制作的飲料、冷飲、糕點(diǎn)，熟肉、肉制品罐頭，剩飯、油煎蛋、糯米糕、涼粉、剩大米和米酒等，俗名“嗜肉菌”。金黃色葡萄球菌侵染人體后主要會(huì)引起一下人體疾患，其一是侵襲性疾病如引起化膿性感染，如傷口化膿、蜂窩織炎，肺炎、腦膜炎、心包炎，敗血癥等；其二是由金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的毒素性疾病，人食用后引起頭暈、惡心、腹瀉、嘔吐等急性胃腸炎等食物中毒癥狀，而由毒素引起的休克綜合癥表現(xiàn)為高熱、低血壓、腹瀉、皮疹、休克。目前金黃色葡萄球菌的檢測(cè)主要依賴(lài)于國(guó)標(biāo)所規(guī)定的生化鑒定，其缺點(diǎn)是操作繁瑣、檢測(cè)周期較長(zhǎng)，無(wú)法適應(yīng)大量的樣品篩查。

免疫學(xué)檢測(cè)是近年來(lái)出現(xiàn)的最快速、準(zhǔn)確、穩(wěn)定的快速檢測(cè)手段，但是檢測(cè)產(chǎn)品全部依賴(lài)進(jìn)口，我國(guó)目前尚無(wú)擁有完全自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)，且可運(yùn)用于檢測(cè)實(shí)踐的快速檢測(cè)產(chǎn)品，該專(zhuān)利以金黃色葡萄球菌為檢測(cè)靶標(biāo)，所要求保護(hù)的技術(shù)涉及金黃色葡萄球菌快速檢測(cè)產(chǎn)品。

實(shí)用新型內(nèi)容

本實(shí)用新型的目的在于提供一種快速，準(zhǔn)確地可快捷檢測(cè)金黃色葡萄球菌的檢測(cè)試劑盒。本實(shí)用新型將致病菌免疫富集方法和基因水平檢測(cè)方法有效結(jié)合，先用特異性抗體將樣品中的病原菌特異性免疫富集，然后PCR擴(kuò)增，這不僅很大程度提高了檢測(cè)靈敏度，而且也提高了檢測(cè)的特異性，大大提高了病原菌檢測(cè)的效率。

具體而言，本實(shí)用新型提供了一種金黃色葡萄球菌免疫PCR檢測(cè)試劑盒，它包括盒體（1），所述盒體（1）內(nèi)設(shè)有襯墊（2），所述襯墊上設(shè)有數(shù)個(gè)容器孔，所述容器孔內(nèi)分別設(shè)有10×PCR?Buffer（3）、dNTP（4）、TaqDNA聚合酶（5）、ddH₂O雙蒸水（6）、正向引物（7）、反向引物（8）、陽(yáng)性對(duì)照溶液（9）、陰性對(duì)照溶液（10）和自封袋（11），所述自封袋（11）內(nèi)設(shè)有包被了抗金黃色葡萄球菌單克隆抗體的免疫PCR管。

在一優(yōu)選例中，所述的抗金黃色葡萄球菌單克隆抗體由小鼠雜交瘤細(xì)胞系5D2G2D9C1，CGMCC?No.8763或5D6D9G3B4，CGMCC?No.8764產(chǎn)生。

本實(shí)用新型的有益效果如下：

本實(shí)用新型的金黃色葡萄球菌免疫PCR檢測(cè)試劑盒集病原菌濃縮、特異性抗體識(shí)別以及PCR擴(kuò)增為一體，具有檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性高、特異性強(qiáng)、靈敏度高以及檢測(cè)快速、使用方便等優(yōu)點(diǎn)，彌補(bǔ)了現(xiàn)有食源性致病菌檢測(cè)技術(shù)費(fèi)時(shí)耗力、靈敏度低的不足。

本實(shí)用新型的金黃色葡萄球菌免疫PCR檢測(cè)試劑盒適用于菌株快速鑒定、食品中毒源檢測(cè)等諸多領(lǐng)域，尤其適用于樣品中微量病原體的快速檢測(cè)。可供質(zhì)監(jiān)部門(mén)、進(jìn)出口檢疫部門(mén)等用于檢測(cè)食樣中的金黃色葡萄球菌。

本實(shí)用新型各個(gè)方面的細(xì)節(jié)將在隨后的章節(jié)中得以詳盡描述。通過(guò)下文以及權(quán)利要求的描述，本實(shí)用新型的特點(diǎn)、目的和優(yōu)勢(shì)將更為明顯。

附圖說(shuō)明

圖1是本實(shí)用新型的檢測(cè)試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2是本實(shí)用新型的檢測(cè)試劑盒的使用流程和原理圖。

附圖標(biāo)記釋義：1.盒體；2.襯墊；3.10×PCR?Buffer；4.dNTP；5.TaqDNA聚合酶；6.ddH₂O雙蒸水；7.正向引物；8.反向引物；9.陽(yáng)性對(duì)照溶液；10.陰性對(duì)照溶液；11.自封袋。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本實(shí)用新型。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本實(shí)用新型而不用于限制本實(shí)用新型的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件如Sambrook等人，分子克隆：實(shí)驗(yàn)室指南（New?York：Cold?Spring?Harbor?Laboratory?Press，1989）中所述的條件，或按照制造廠(chǎng)商所建議的條件。除非另外說(shuō)明，否則百分比和份數(shù)按重量計(jì)算。

除非另行定義，文中所使用的所有專(zhuān)業(yè)與科學(xué)用語(yǔ)與本領(lǐng)域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于本實(shí)用新型中。文中所述的較佳實(shí)施方法與材料僅作示范之用。

實(shí)施例1.本實(shí)用新型的檢測(cè)試劑盒的制備

（一）本實(shí)用新型的用于檢測(cè)金黃色葡萄球菌的免疫PCR管的具體包被方法如下：