[實用新型]一種快速定量檢測L-FABP的膠體金試紙

有效

• 申請號: 201420117615.8
• 申請日: 2014-03-14
• 公開（公告）號: CN203881772U
• 公開（公告）日: 2014-10-15
• 發明（設計）人: 趙俊平;劉紅劍;何曉紅;楊柳
• 申請（專利權）人: 瑞萊生物工程（深圳）有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京律誠同業知識產權代理有限公司 11006
• 代理人: 黃韌敏;黃萍

技術領域

本實用新型屬于臨床醫學診斷領域，具體涉及一種用于定量檢測L-FABP的膠體金試紙。

背景技術

L-FABP(肝型脂肪酸結合蛋白)屬于脂肪酸結合蛋白(FABP)家族的成員之一，是一組低分子量的可以結合長鏈脂肪酸的高保守性胞質蛋白。根據其組織特異性分布，已經分離出9種不同的FABP,分別為肝型(L-FABP)、小腸型(I-FABP)、心肌型(H-FABP)、脂肪細胞型(A-FABP)、表皮型(E-FABP)、回腸型(II-FABP)、腦型(B-FABP)、髓鞘型(M-FABP)、睪丸型(T-FABP)，主要在肝臟、小腸及腎臟表達。在腎臟中，L-FABP主要表達在近曲小管，在腎臟疾病出現大量蛋白尿、缺血和毒性等損害時，推測L-FABP參與尿夜游離脂肪酸的重吸收，促進β氧化供能，從而減輕氧應激損傷，從而保護腎臟。Yamamoto等人在研究腎臟缺血/再灌注與急性缺血性腎損傷的聯系，用缺氧指示劑派莫硝唑顯示組織缺氧損傷的范圍，結果發現，在缺血/再灌注后2h時，在人L-FABP轉基因小鼠和野生小鼠的腎組織中在腎臟外髓質和皮質部均出現派莫硝唑陽性區域，但轉基因小鼠的損傷范圍明顯較小。進一步在缺氧狀態下，通過檢測轉基因小鼠近端小管細胞和非轉染細胞中ROS水平，發現轉基因小鼠近端小管細胞ROS水平較非轉染細胞顯著下降，此研究結果提示高表達腎臟可能起到預防近端小管細胞發生缺血/再灌注損傷的作用。L-FABP分子質量較小，只有14.4KD，在肝細胞、腎小管細胞受到損傷時,細胞膜通透性變化可使其快速溢出，因此L-FABP可作為一個敏感、特異的組織損傷標志物，能很好的反應腎小管的損傷。

在腎臟中，L-FABP最引人注目的臨床應用是作為AKI（急性腎損傷）診斷生物標志物。在一項研究尿L-FABP與AKI的關系中，對92例AKI患者與62例無AKI患者進行橫斷面研究，采用ROC曲線評價L-FABP診斷AKI的能力，ROC曲線下面積為0.93，是一個很好的AKI診斷分子標志物，并且研究指出，尿L-FABP含量越高，病人預后越差。

另外，近期的研究表明，尿L-FABP可以很好地預測AKI的發生。Portila等人的研究發現，在CBP手術后4h，尿L-FABP的含量在AKI患者中的含量顯著高于非AKI患者的L-FABP含量。根據ROC曲線分析，AUC為0.810，可以作為手術后獨立預測AKI風險的生物標志物；在一項臨床研究中，在感染性休克ICU病人中，約30%左右的ICU病人，被檢測出患有AKI，并且結果顯示L-FABP作為標志物在判斷感染性休克病人并發AKI時，ROC曲線上的AUC高達0.99，除此之外，研究結果還顯示，病死患者中尿L-FABP的含量顯著高于存活者的尿L-FABP的含量，尿L-FABP的含量與死亡率成顯著性正相關，可以說明L-FABP在預測ICU患者的死亡率方面有著非常好的效果；而在一項造影劑與AKI關系的研究中證實，66患者中有13人在非急診血管造影前就出現尿L-FABP顯著升高；隨后，13人都出現了造影劑引發的腎病，尿L-FABP可以作為預測和診斷患者使用造影劑而導致的造影劑急性腎損傷（CI-AKI）。

隨著其它的研究逐步深入，尿L-FABP顯示在檢測局灶性腎小球壞死、糖尿病腎病、冠脈造影劑所致腎病、心臟轉流術后急性腎損傷以及腎臟移植缺血再灌注造成的腎損傷方面，均顯示了非常好的預測作用。所以，尿L-FABP可以作為非常好的診斷AKI以及預測AKI的生物標志物。

免疫膠體金技術(Immune?colloidal?gold?technique)是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體的一種新型的免疫標記技術。膠體金是由氯金酸（HAuCl4）在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，聚合成為特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩定的膠體狀態，稱為膠體金。膠體金在弱堿環境下帶負電荷，可與蛋白質分子的正電荷基團形成牢固的結合，由于這種結合是靜電結合，所以不影響蛋白質的生物特性。膠體金除了與蛋白質結合以外，還可以與許多其它生物大分子結合。根據膠體金的一些物理性狀，如高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應，加上結合物的免疫和生物學特性，因而使膠體金廣泛地應用于免疫學、組織學、病理學和細胞生物學等領域。