[實用新型]豬偽狂犬病毒gB和gE抗體的ELISA檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201420110907.9
• 申請日: 2014-03-12
• 公開（公告）號: CN203838160U
• 公開（公告）日: 2014-09-17
• 發明（設計）人: 廖園園;漆世華;秦偉;朱薇;孫慶歌;鄭良益;李建;謝紅玲;溫文生;馮釗
• 申請（專利權）人: 武漢中博生物股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 張火春;王汛琳

技術領域

本實用新型屬于獸用疫病檢測技術領域，具體涉及一豬偽狂犬病毒gB和gE抗體的ELISA檢測試劑盒。

背景技術

偽狂犬病（Pseudorabies）是由偽狂犬病毒（Pseudorabies?virus，PRV）引起的包括多種家畜和野生動物共患的一種急性傳染病。豬是偽狂犬病最主要的貯存宿主和傳染源。健康豬與病豬、帶毒豬直接接觸可感染本病。成年豬常為隱性感染；受感染的懷孕母豬則出現流產、死胎、弱胎和木乃伊胎等病征；受感染的新生仔豬出現發熱及神經癥狀，甚至衰竭死亡，死亡率可達100%。偽狂犬病對我國乃至全球養豬業的健康發展造成了巨大的經濟損失，成為嚴重危害養豬業健康發展的重大傳染病之一。

在PRV與宿主的相互作用中，結構蛋白gB非常保守，具有良好的免疫原性且抗原表位分析清晰，可作為理想的血清學檢測用抗原。gE糖蛋白是PRV的一種十分重要的糖蛋白，在決定病毒的毒力及神經嗜性等方面起著重要作用，但gE不是PRV增殖所必需的蛋白，常作為缺失的候選基因。豬偽狂犬病毒gE抗體檢測能有效地區分野毒感染，結合gB抗體的檢測，能在區分野毒感染的同時監測疫苗抗體水平。

實用新型內容

本實用新型的目的是為了提供一種快速、有效、同時檢測豬偽狂犬病毒gB和gE抗體的ELISA檢測試劑盒。為實驗動物篩選、PRV疫苗效果的評價和豬場PRV凈化提供新的快捷高效的工具。

為了實現上述目的，本實用新型采用如下技術方案：

一種豬偽狂犬病毒gB和gE抗體的ELISA檢測試劑盒，該試劑盒有一個盒體1，盒體1內設有抗原包被反應板存放槽2、豬偽狂犬病毒gB抗體陽性對照液孔槽3、豬偽狂犬病毒gE抗體陽性對照液孔槽4、豬偽狂犬病毒gB和gE抗體陰性對照液孔槽5、樣品稀釋液孔槽6、酶結合物孔槽7、濃縮洗滌液孔槽8、酶底物A溶液孔槽9、酶底物B溶液孔槽10、終止液孔槽11和操作說明書存放槽12；抗原包被反應板存放槽2內放置抗原包被反應板，各孔槽中（3-11）放置裝有相應溶液的試劑瓶，操作說明書存放槽12內放置操作說明書。所述的抗原包被反應板分為檢測區Ⅰ和檢測區Ⅱ，檢測區Ⅰ和檢測區Ⅱ分別包被豬偽狂犬病毒gB蛋白抗原和豬偽狂犬病毒gE蛋白抗原。

上述的豬偽狂犬病毒gB和gE蛋白抗原均為高純度的原核表達蛋白，可按照本領域常規技術制備或購買市售產品均可。

所述的抗原包被反應板的規格優選為96孔，從上至下平均分為檢測區Ⅰ和檢測區Ⅱ，每個區域48孔。

所述的樣品稀釋液優選為在0.01mol/L、pH?7.2-7.4的磷酸鹽緩沖液中加入BSA和?NaN₃，使BSA和?NaN₃的濃度分別為0.1-10%和0.01-0.05%；按20mL/瓶分裝。

所述的豬偽狂犬病毒gB抗體陽性對照液和豬偽狂犬病毒gE抗體陽性對照液優選為將豬偽狂犬病毒gB和gE抗體的豬陽性血清分別用樣品稀釋液100倍稀釋配制而成；分別按1mL/瓶分裝。

所述的豬偽狂犬病毒gB和gE抗體陰性對照液優選為將不含有豬偽狂犬病毒gB和gE抗體的豬陰性血清用樣品稀釋液100倍稀釋配制而成；按1mL/瓶分裝。

所述的酶結合物優選為用樣品稀釋液將商品化小鼠抗豬IgG酶標二抗按1:2000稀釋制成；按10mL/瓶分裝。

所述的濃縮洗滌液優選為在0.1mol/L?PBS溶液中加入吐溫-20（Tween-20），使得吐溫-20的濃度為0.5%（v/v），使用時用水10倍稀釋；按30mL/瓶分裝。

所述的酶底物A溶液優選為含有0.01-0.1%過氧化氫（H₂O₂）的1%乙酸鈉溶液，pH5.0；按5mL/瓶分裝。

所述的酶底物B溶液優選為溶有0.2-1g?3,3’,5,5’-四甲基聯苯胺的10mL二甲基亞砜與溶有10g乙酸鈉、pH5.0的1000mL水取990mL的混合溶液；按5mL/瓶分裝。

所述的終止液優選為取54.3mL?95%濃硫酸，加蒸餾水至1000mL得到；按5mL/瓶分裝。

本實用新型采用酶聯免疫間接法，將豬偽狂犬病毒gB和gE蛋白抗原分別包被在抗原包被板的兩個檢測區內，可分別于待檢樣品中的特異性抗體反應，形成抗原抗體復合物，再加入小鼠抗豬IgG二抗的酶結合物，形成“抗原-抗體-二抗-酶”復合物，最后通過加入酶底物A液和B液進行顯色，并讀取光吸收值（OD_450nm）。