[實用新型]一種豬霍亂沙門氏菌酶聯免疫檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201420092130.8
• 申請日: 2014-03-03
• 公開（公告）號: CN203705456U
• 公開（公告）日: 2014-07-09
• 發明（設計）人: 劉箐;張超
• 申請（專利權）人: 上海理工大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/558
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 馮子玲

技術領域

本實用新型屬于生物技術和免疫學領域，具體涉及一種檢測豬霍亂沙門氏菌的酶聯免疫試劑盒。

背景技術

豬霍亂沙門氏菌（Shigella?boydii）屬于志賀氏菌C群，是一種重要的食源性致病菌，可通過受污染的肉、蛋、魚及其制品等動物性產品，瓜子仁等進入人體，引起發熱、腹痛、里急后重，有時表現為全身中毒癥狀為中毒性痢疾，治療不徹底轉為慢性。

目前豬霍亂沙門氏菌的檢測主要依賴于國標所規定的生化鑒定，其缺點是操作繁瑣、檢測周期較長，無法適應大量的樣品篩查。免疫學檢測是近年來出現的最快速、準確、穩定的快速檢測手段，但國內外目前尚無可運用于檢測實踐的快速檢測產品，該專利以豬霍亂沙門氏菌為檢測靶標，所要求保護的技術涉及豬霍亂沙門氏菌快速檢測產品。

實用新型內容

本實用新型的目的是提供一種檢測豬霍亂沙門氏菌的檢測試劑盒。

具體而言，本實用新型提供了一種豬霍亂沙門氏菌酶聯免疫檢測試劑盒，包括盒體，所述盒體內設有自封袋和襯墊，所述自封袋內設有包被了作為捕捉抗體的抗豬霍亂沙門氏菌單克隆抗體的酶標反應板，所述襯墊上設有數個容器孔，所述容器孔內分別設有陽性對照溶液、陰性對照溶液、10×濃縮洗滌液、顯色液、終止液、酶標抗體溶液和酶標抗體稀釋液，所述酶標抗體為辣根過氧化物酶標記的作為檢測抗體的抗豬霍亂沙門氏菌的單克隆抗體。

在一優選例中，所述酶標反應板由支撐架和設于支撐架上的可拆卸式微孔條構成，所述微孔條上設有微孔，所述微孔中包被有作為捕捉抗體的抗豬霍亂沙門氏菌單克隆抗體。

在另一優選例中，所述的作為捕捉抗體的抗豬霍亂沙門氏菌單克隆抗體由小鼠雜交瘤細胞系Mab05-F10，CGMCC?No.7712產生，所述作為檢測抗體的抗豬霍亂沙門氏菌的單克隆抗體由小鼠雜交瘤細胞系Mab05-D10，CGMCC?No.7710產生。

此外，在本實用新型的試劑盒中還可包含使用說明書，用于說明其中裝載的試劑的使用方法。

本實用新型的酶聯免疫試劑盒的檢測原理及有益效果如下：

本實用新型的試劑盒采用的是雙抗體夾心酶聯免疫法。當在酶標反應板微孔條上預包被抗豬霍亂沙門氏菌單克隆抗體（捕捉抗體）時，加入樣品溶液或標準品后，再加入辣根過氧化物酶標記的抗豬霍亂沙門氏菌單克隆抗體（檢測抗體），樣品或標準品中存在的豬霍亂沙門氏菌與酶標反應板上包被的抗豬霍亂沙門氏菌單克隆抗體相結合，加入檢測抗體后，會形成“抗體—抗原—酶標抗體”復合物，經過TMB（四甲基聯苯胺）顯色后會形成黃色物質，從而判斷樣品中豬霍亂沙門氏菌的存在與否以及存在的量。

用酶標儀于450nm下測定吸光度值。陰性對照≤0.1、陽性對照≥0.3，實驗結果有效，否則結果判定為無效；檢測孔OD值≥0.2時，判定為陽性；檢測孔OD值介于0.1-0.2之間時，判定為弱陽性；檢測孔OD值≤0.1判定為陰性。

試驗表明，本實用新型的豬霍亂沙門氏菌酶聯免疫試劑盒，有較高的靈敏度和準確度。板間誤差小于5%，板內CV小于3%。與單增李斯特、鼠傷寒沙門、腸炎沙門、福氏志賀、宋內氏志賀、鮑氏志賀、出血性大腸桿菌O157:H7、阪崎腸桿菌、小腸耶爾森氏菌、肺炎鏈球菌、蠟樣芽孢桿菌等均無交叉反應。

總之，本實用新型的試劑盒對樣品的前處理要求低，操作簡便，檢測極限為105cfu/ml，特異性和穩定性好，并與大多數食源性致病菌都沒有交叉反應。

本實用新型各個方面的細節將在隨后的章節中得以詳盡描述。通過下文以及權利要求的描述，本實用新型的特點、目的和優勢將更為明顯。

附圖說明

圖1是本實用新型的檢測試劑盒的結構示意圖；

圖2是本實用新型的檢測試劑盒的酶標反應板的示意圖。

附圖標記釋義：1.盒體；2.襯墊；3.容器孔；4.微孔板；5.支撐架；6.微孔條；7.微孔。

具體實施方式

下面結合具體實施例，進一步闡述本實用新型。應理解，這些實施例僅用于說明本實用新型而不用于限制本實用新型的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件如Sambrook等人，分子克隆：實驗室指南（New?York：Cold?Spring?Harbor?Laboratory?Press，1989）中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數按重量計算。