[實(shí)用新型]單管聯(lián)合測(cè)定乙醛脫氫酶2基因與亞甲基四氫葉酸還原酶基因突變位點(diǎn)的試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201420084983.7
• 申請(qǐng)日: 2014-02-27
• 公開（公告）號(hào): CN204162727U
• 公開（公告）日: 2015-02-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 葉輝銘;蘇曉崧;張忠英
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廈門大學(xué)附屬中山醫(yī)院;葉輝銘
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 廈門南強(qiáng)之路專利事務(wù)所(普通合伙) 35200
• 代理人: 馬應(yīng)森

技術(shù)領(lǐng)域

本實(shí)用新型屬于分子生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域，尤其是涉及一種單管聯(lián)合測(cè)定乙醛脫氫酶2(ALDH2)基因與亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因突變位點(diǎn)的試劑盒。該技術(shù)可應(yīng)用到臨床的檢測(cè)，流行病學(xué)的篩查以及種群基因組差異的研究。尤其是其可應(yīng)用于臨床體檢與藥物基因組學(xué)檢測(cè)。

背景技術(shù)

隨著高通量測(cè)序的普及以及人類基因組計(jì)劃的完成，個(gè)體化診療技術(shù)正逐步邁向日常臨床診斷與治療工作，并正逐漸影響著臨床診療思維和個(gè)人健康管理的方式。單核苷酸多態(tài)性分析(SNP)是個(gè)體化診療的重要組成部分，目前主要應(yīng)用于患者的藥物基因組學(xué)檢測(cè)中，對(duì)患者的用藥劑量與用藥周期進(jìn)行指導(dǎo)。實(shí)際上，SNP分析不僅僅能作為有效的藥物基因組學(xué)標(biāo)志物，其亦可作為一種優(yōu)良的疾病篩查與防治標(biāo)志物在體檢中進(jìn)行應(yīng)用。

1、ALDH2基因的臨床研究進(jìn)展

乙醛脫氫酶ALDH是酒精代謝中將乙醛轉(zhuǎn)化為乙酸的關(guān)鍵酶，位于12號(hào)染色體的ALDH2基因是線粒體乙醛脫氫酶的主要編碼基因。當(dāng)ALDH2基因發(fā)生錯(cuò)意SNP突變時(shí)，其編碼合成的ALDH酶活性將發(fā)生不同程度的降低。ALDH酶活性的降低將引起機(jī)體對(duì)乙醛代謝能力的下降，導(dǎo)致大量攝入酒精后血清乙醛濃度的急劇升高，最終導(dǎo)致對(duì)肝臟功能的急性損害，并與肝臟、胃、食管等消化系統(tǒng)癌癥的發(fā)生相關(guān)^[1-4]。同時(shí)，ALDH酶已被證明在重要的急性心血管藥物——硝酸甘油的代謝活化通路中扮演著重要的角色，其活性的降低乃至喪失將引起硝酸甘油的療效降低甚至完全失效^[5]。根據(jù)美國國立生物信息技術(shù)中心NCBI數(shù)據(jù)庫的數(shù)據(jù)，ALDH2基因的Glu504Lys突變?cè)谥袊巳褐兴急壤哌_(dá)30％，為中國人群最常見的ALDH2點(diǎn)突變。近年來研究^[6,7]還表明，該突變可能與漢族人群中的二型糖尿病和冠心病的發(fā)病相關(guān)。

2、MTHFR基因的臨床研究進(jìn)展

亞甲基四氫葉酸還原酶MTHFR是葉酸代謝中的關(guān)鍵酶之一，可將還原型輔酶I(NADPH)相關(guān)的5,10-亞甲基四氫葉酸還原為5-甲基四氫葉酸。前者生物學(xué)作用為細(xì)胞內(nèi)一碳基團(tuán)的?傳遞體，參與嘌呤和嘧啶的合成及DNA修復(fù)過程；而5-甲基四氫葉酸作為甲基供體，在甲硫氨酸合成酶的催化下將甲基基團(tuán)提供給同型半胱氨酸生成蛋氨酸，并進(jìn)一步復(fù)甲基化為S-腺苷甲硫氨酸，而參與體內(nèi)廣泛的甲基化反應(yīng)。當(dāng)MTHFR基因發(fā)生SNP錯(cuò)意突變時(shí)，其活性下降將導(dǎo)致體內(nèi)葉酸代謝過程障礙從而引發(fā)多種疾病，包括導(dǎo)致唐氏綜合征風(fēng)險(xiǎn)增高和新生兒發(fā)育異常^[8-10]，伴高同型半胱氨酸血癥的梗阻性腦卒中^[11]，還與深靜脈血栓的發(fā)生密切相關(guān)^[12]。根據(jù)美國國立生物信息技術(shù)中心NCBI數(shù)據(jù)庫的數(shù)據(jù)，MTHFR基因的C677T單核苷酸SNP多態(tài)性在中國人群中最為普遍，漢族人口攜帶者比率約為27％-46％。

3、焦磷酸測(cè)序方法學(xué)的優(yōu)點(diǎn)

目前，對(duì)于單核苷酸多態(tài)性SNP的檢測(cè)技術(shù)主要包括基于等位基因特異性雜交的Taqman探針技術(shù)，分子信標(biāo)技術(shù)等；基于核酸內(nèi)切酶的限制性長度多態(tài)性技術(shù)，引物入侵分析技術(shù)等；基于高度特異性DNA連接酶的寡核苷酸連接分析技術(shù)；基于引物延伸的直接測(cè)序法和等位基因特異性延伸法等。但這些方法大多操作復(fù)雜，成本昂貴，因而沒有在大規(guī)模SNP檢測(cè)中得到應(yīng)用。焦磷酸測(cè)序法由于其良好的定量性能，無需電泳或熒光標(biāo)記，易于自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)已成為SNP檢測(cè)最主要的方法。但是，由于以往的焦磷酸測(cè)序中各個(gè)位點(diǎn)的擴(kuò)增反應(yīng)需要單獨(dú)進(jìn)行，這意味著需要檢測(cè)的項(xiàng)目有幾個(gè)突變位點(diǎn)，則需要相應(yīng)數(shù)量的擴(kuò)增反應(yīng)。這無形中大大的提高了焦磷酸測(cè)序檢測(cè)作為臨床檢測(cè)的成本和價(jià)格，被動(dòng)地將大量需要進(jìn)行該檢測(cè)的患者拒之門外。本實(shí)用新型將ALDH2基因與MTHFR基因兩個(gè)突變點(diǎn)進(jìn)行單管的多位點(diǎn)擴(kuò)增反應(yīng)進(jìn)行焦磷酸測(cè)序的檢測(cè)，降低了檢測(cè)的成本、簡化了技術(shù)流程，從而降低了檢測(cè)的費(fèi)用與成本，降低了個(gè)體化醫(yī)學(xué)的門檻。

參考文獻(xiàn)：

1、閻明朱孔錫孟繁立王紅娟吳美玲.乙醛脫氫酶基因多態(tài)性與酒精性肝病的關(guān)系.中華肝臟病雜志，2003，11(11)：654-656。

2、丁建華,李蘇平,吳建中,周建農(nóng),高長明,周學(xué)富,丁保國,王如鴻.乙醛脫氫酶2與飲酒和HBsAg致肝癌交互作用.中國公共衛(wèi)生,2003,19(3):260-262。

3、楊玉鳳,沈孝兵,張嬌.乙醛脫氫酶2基因多態(tài)性及環(huán)境暴露與胃癌易感性.中國公共衛(wèi)生,2006,22(4):435-436。