[實用新型]一種出血性大腸桿菌O157:H7酶聯免疫檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201420072168.9
• 申請日: 2014-02-19
• 公開（公告）號: CN203732546U
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發明（設計）人: 劉箐;郭慧琴;邱實
• 申請（專利權）人: 上海理工大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 馮子玲

技術領域

本實用新型屬于生物技術和免疫學領域，具體涉及一種檢測出血性大腸桿菌O157:H7的酶聯免疫試劑盒。

背景技術

出血性大腸桿菌O157:H7（Escherichia?coli?O157:H7）是腸道大腸桿菌的主要血清型，可通過牛肉及其制品、牛奶及其制品、雞肉、蔬菜、水果、飲料、水等傳播。出血性大腸桿菌O157:H7可引起腸炎，受感染病人的典型臨床癥狀為血便、腹痛、低熱或不發熱，約有10%的病人可發展成為溶血性尿毒癥及血栓性血小板減少性紫癜，并且可對被感染病人的腸道、肝、脾、腎、淋巴、腦、呼吸系統和神經系統造成損傷。老人和兒童為高危人群，易發生溶血性尿毒癥，死亡率高達30%以上。世界衛生組織已經將出血性大腸桿菌O157:H7腸炎列為新發傳染病。出血性大腸桿菌O157:H7感染已經成為一個世界性的衛生問題。

目前出血性大腸桿菌O157:H7的檢測主要依賴于國標所規定的生化鑒定，其缺點是操作繁瑣、檢測周期較長，無法適應大量的樣品篩查。分子生物學和免疫學檢測是近年來出現的最快速、準確、穩定的快速檢測手段，但是檢測產品全部依賴進口，我國目前尚無擁有完全自主知識產權，且可運用于檢測實踐的快速檢測產品，該專利以出血性大腸桿菌O157:H7為檢測靶標，所要求保護的技術涉及出血性大腸桿菌O157:H7快速檢測產品。

實用新型內容

本實用新型的目的是提供一種檢測出血性大腸桿菌O157:H7的檢測試劑盒。

具體而言，本實用新型提供了一種出血性大腸桿菌O157:H7酶聯免疫檢測試劑盒，包括盒體，所述盒體內設有自封袋和襯墊，所述自封袋內設有包被了作為捕捉抗體的抗出血性大腸桿菌O157:H7單克隆抗體的酶標反應板，所述襯墊上設有數個容器孔，所述容器孔內分別設有陽性對照溶液、陰性對照溶液、10×濃縮洗滌液、顯色液、終止液、酶標抗體溶液和酶標抗體稀釋液，所述酶標抗體為辣根過氧化物酶標記的作為檢測抗體的抗出血性大腸桿菌O157:H7的單克隆抗體。

在一優選例中，所述酶標反應板由支撐架和設于支撐架上的可拆卸式微孔條構成，所述微孔條上設有微孔，所述微孔中包被有作為捕捉抗體的抗出血性大腸桿菌O157:H7單克隆抗體。

在另一優選例中，所述的作為捕捉抗體的抗出血性大腸桿菌O157:H7單克隆抗體由小鼠雜交瘤細胞系3A8F11B10E7產生，所述作為檢測抗體的抗出血性大腸桿菌O157:H7的單克隆抗體由小鼠雜交瘤細胞系GS2-D3產生。

此外，在本實用新型的試劑盒中還可包含使用說明書，用于說明其中裝載的試劑的使用方法。

本實用新型的酶聯免疫試劑盒的檢測原理及有益效果如下：

本實用新型的試劑盒采用的是雙抗體夾心酶聯免疫法。當在酶標反應板微孔條上預包被抗出血性大腸桿菌O157:H7單克隆抗體（捕捉抗體）時，加入樣品溶液或標準品后，再加入辣根過氧化物酶標記的抗出血性大腸桿菌O157:H7單克隆抗體（檢測抗體），樣品或標準品中存在的出血性大腸桿菌O157:H7與酶標反應板上包被的抗出血性大腸桿菌O157:H7單克隆抗體相結合，加入檢測抗體后，會形成“抗體—抗原—酶標抗體”復合物，經過TMB（四甲基聯苯胺）顯色后會形成黃色物質，從而判斷樣品中出血性大腸桿菌O157:H7的存在與否以及存在的量。

用酶標儀于450nm下測定吸光度值。陰性對照≤0.1、陽性對照≥0.3，實驗結果有效，否則結果判定為無效；檢測孔OD值≥0.2時，判定為陽性；檢測孔OD值介于0.1-0.2之間時，判定為弱陽性；檢測孔OD值≤0.1判定為陰性。

試驗表明，本實用新型的出血性大腸桿菌O157:H7酶聯免疫試劑盒，有較高的靈敏度和準確度。板間誤差小于10%，板內CV小于3%。與單增李斯特、豬霍亂沙門、鼠傷寒沙門、腸炎沙門、福氏志賀、宋內氏志賀、鮑氏志賀、副溶血弧菌、阪崎腸桿菌、阪崎腸桿菌、小腸耶爾森氏菌、肺炎鏈球菌、蠟樣芽孢桿菌等均無交叉反應。

總之，本實用新型的試劑盒對樣品的前處理要求低，操作簡便，檢測極限為105cfu/ml，特異性和穩定性好，并與大多數食源性致病菌都沒有交叉反應。

本實用新型各個方面的細節將在隨后的章節中得以詳盡描述。通過下文以及權利要求的描述，本實用新型的特點、目的和優勢將更為明顯。

附圖說明

圖1是本實用新型的檢測試劑盒的結構示意圖；

圖2是本實用新型的檢測試劑盒的酶標反應板的示意圖。

附圖標記釋義：1.盒體；2.襯墊；3.容器孔；4.微孔板；5.支撐架；6.微孔條；7.微孔。