[發明專利]ETS結構域轉錄因子FEV蛋白單克隆抗體及其應用

有效

• 申請號: 201410857528.0
• 申請日: 2014-12-31
• 公開（公告）號: CN104592386B
• 公開（公告）日: 2018-07-13
• 發明（設計）人: 鐘惟德;吳群力
• 申請（專利權）人: 廣州市第一人民醫院
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N5/20
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 劉孟斌

本發明涉及雜交瘤細胞系及其產生的單克隆抗體與應用，特別是涉及針對ETS結構域轉錄因子FEV蛋白單克隆抗體和分泌該抗體的雜交瘤細胞系以及該抗體的應用。本發明所述單克隆抗體是以FEV蛋白為靶蛋白，設計合成多肽A序列，與載體蛋白偶聯作為免疫原，通過所述免疫原制備獲得；所述多肽A序列如SEQ ID NO.1所示；所述載體蛋白為KLH；所述單克隆抗體識別FEV蛋白的多肽A序列；所述單克隆抗體的輕鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，重鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。本發明提供的單克隆抗體可以準確檢測樣品中FEV蛋白的水平，在臨床檢測中將會得到廣泛應用。

技術領域

本發明涉及雜交瘤細胞系及其產生的單克隆抗體與應用，特別是涉及針對ETS結構域轉錄因子FEV蛋白單克隆抗體和分泌該抗體的雜交瘤細胞系以及該抗體的應用。

技術背景

前列腺癌是男性泌尿生殖系統常見的惡性腫瘤。世界范圍內，前列腺癌發病率在男性所有惡性腫瘤中位居第二。在美國前列腺癌的發病率已經超過肺癌，成為第一位危害男性健康的腫瘤，據美國癌癥協會估計，2010年美國大約有217 730例新發前列腺癌，有32050例將死于此病。在歐洲，每年得到確診的新發前列腺癌病例大約有260萬人，前列腺癌占全部男性癌癥的11％，占全部男性癌癥死亡人數的9％。

調查發現大約30％-50％的前列腺患者在初診時就已有轉移發生。前列腺癌是否發生轉移是選擇治療方案的重要依據，對于進展性前列腺癌，往往抗雄激素、化療等多種治療后仍然轉移而治療失敗。因此早期預測前列腺癌的轉移潛能及提供新的有效治療手段，對于改善病人預后及減少死亡率具有重要意義。

FEV與ERG、Fli-1/ErgB同屬于ETS家族基因的ERG亞族，特異表達于腦組織、小腸和正常前列腺。研究發現，在小腸神經內分泌癌及類癌中，FEV與腫瘤的轉移密切相關。FEV在前列腺癌的研究未見相關報道。根據前期結果，我們首次表明，FEV作為ETS家族一員，可能作為抑癌基因，其低表達后可促進前列腺癌的發展進程。原因如下：運用基因芯片檢測210例前列腺癌組織及正常組織，發現FEV是表達下調最明顯的mRNA分子，其表達在細胞及組織水平達到驗證；細胞實驗表明，FEV過表達后可抑制前列腺癌細胞的增殖、侵襲及轉移；結合臨床樣本資料，FEV與前列腺癌的發展進程(侵襲、轉移)密切相關，是獨立的臨床預后靶標。因此制備FEV單克隆抗體檢測FEV水平對其在臨床監測中的應用具有重要意義。

國內外已有針對FEV的多克隆抗體，但其單克隆抗體少見。

發明內容

本發明的目的是提供能與FEV蛋白專一結合的單克隆抗體。

本發明所述單克隆抗體是以FEV蛋白為靶蛋白，設計合成多肽A序列，與載體蛋白偶聯作為免疫原，通過所述免疫原制備獲得；所述多肽A序列如SEQ ID NO.1所示；所述載體蛋白為KLH；所述單克隆抗體識別FEV蛋白的多肽A序列；所述單克隆抗體的輕鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，重鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。

本發明使用可以誘發機體產生免疫反應并生成抗體的多肽序列，偶聯至KLH作為免疫原免疫小鼠，采用雜交瘤技術經過細胞融合，并篩選得到能持續、穩定分泌抗FEV蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞株，由該細胞株分泌得到單克隆抗體。

由這條多肽序列與載體蛋白偶聯作為免疫原制備獲得的單克隆抗體能夠識別FEV蛋白的多肽A序列，將這個單克隆抗體稱之為clone6D9。

間接ELISA表明clone 6D9可用于FEV蛋白的檢測。免疫印跡法表明clone 6D9可用于前列腺組織中FEV蛋白的檢測。

本發明還提供了產生所述單克隆抗體的雜交瘤細胞。

本發明提供的單克隆抗體可以準確檢測樣品中FEV蛋白的水平，在臨床檢測中將會得到廣泛應用。

附圖說明