[發明專利]雞堆型艾美耳球蟲基因重組疫苗及其引物和應用

在審

• 申請號: 201410857205.1
• 申請日: 2014-12-26
• 公開（公告）號: CN104611366A
• 公開（公告）日: 2015-05-13
• 發明（設計）人: 李廣興;馮儷;黃藝華
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/30;C12N15/11;A61K48/00;A61K39/012;A61P33/02
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1.一種雞堆型艾美耳球蟲基因重組疫苗(pVAX1-Hsp90)，其特征在于，序列如序列表Seq?No.1所示。

2.一種用于構建雞堆型艾美耳球蟲基因重組疫苗(pVAX1-Hsp90)的引物對，其特征在于，上引物P1：如序列表Seq?No.2所示，下引物P2：如序列表Seq?No.3所示。

3.根據權利要求1所述的一種雞堆型艾美耳球蟲基因重組疫苗(pVAX1-Hsp90)在治療和/或預防雞球蟲的藥物中的應用。

4.一種雞堆型艾美耳球蟲基因重組疫苗(pVAX1-Hsp90)的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)根據現有質粒pMD18-T-Hsp90的核苷酸序列設計引物對，上引物，序列如序列表Seq?No.2所示，下引物如序列表Seq?No.3所示；

(2)進行常規鏈式聚合酶反應擴增Hsp90基因；

(3)構建重組質粒pVAX1-Hsp90。

5.根據權利要求4所述的一種雞堆型艾美耳球蟲基因重組疫苗(pVAX1-Hsp90)的構建方法，其特征在于，所述的步驟(2)采用常規鏈式聚合酶反應的具體步驟如下：將混合液在94℃預變性5min，然后進入下列循環：94℃、30s，59.2℃、30s，72℃、2min，共進行30個循環，最后72℃延伸10min，擴增完畢后置4℃終止反應；

所述混合液組成如下所示：

6.根據權利要求4所述的一種雞堆型艾美耳球蟲基因重組疫苗(pVAX1-Hsp90)的構建方法，其特征在于，所述的步驟(3)質粒pVAX1-Hsp90的重組構建方法具體步驟如下：用限制性內切酶BamH?I和Pst?I酶切消化PCR所得Hsp90基因產物和pVAX1載體，分別獲得Hsp90基因片段和線性載體pVAX1，將所得片段膠回收后進行體外連接，構建重組質粒pVAX1-Hsp90，將疑似陽性的質粒送華大基因測序，將測序鑒定為陽性的重組質粒命名為pVAX1-Hsp90。