[發明專利]一種與豬眼肌面積性狀有關的豬UNC13B基因SNP標志物

有效

• 申請號: 201410856669.0
• 申請日: 2014-12-31
• 公開（公告）號: CN104561306B
• 公開（公告）日: 2018-07-20
• 發明（設計）人: 胡曉湘;方素云;王潤銘;楊瑞飛;張蘇紅;李寧
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.一種與豬眼肌面積性狀有關的豬UNC13B基因SNP標志物，其特征在于，該標志物為UNC13B基因chr1:263861722位點的T/C突變，所述位點基于的Assembly編號為Sscrofa10.2。

2.一種用于檢測權利要求1所述的SNP標志物的特異性引物，其特征在于，所述引物為：

STA： 5′-CACACTCATTGTATCAATCATAGAGGAA-3′，

LSP： 5′- AACCACCAAAGAGAGAGAGCCA -3′，

ASP1：5′- AGAATTCCTACACGCTTGTTCTGAAT -，3′

ASP2：5′- GAATTCCTACACGCTTGTTCTGAAC -3′，

其中，STA為預擴增上游引物，LSP為用于預擴增和鑒定PCR的下游引物，ASP1為用于鑒定PCR的分型引物1，ASP2為用于鑒定PCR的分型引物2；

STA和LSP用于通過預擴增PCR擴增UNC13B基因chr1:263861722位點上下游的序列獲得99bp預擴增產物，ASP1和ASP2用于鑒定待測豬個體的UNC13B基因chr1:263861722位點的基因型。

3.一種檢測權利要求1所述的SNP標志物的方法，其特征在于，包括利用權利要求2中所述的引物進行以下步驟：

預擴增PCR：以待測豬基因組DNA為模板，STA和LSP為引物通過PCR反應獲得UNC13B基因chr1:263861722位點上下游共99bp的預擴增產物；

鑒定PCR：以預擴增產物為模板，LSP為下游引物，ASP1/ASP2為上游引物，獲得鑒定PCR擴增產物，判定所述SNP標志物的基因型。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，預擴增PCR的反應體系為：

2×Multiplex PCR Master Mix : 2.5 μl

10×STA primer pool : 0.5 μl

ddH₂O： 0.75 μl

DNA 模板: 1.25 μl；

預擴增PCR的反應程序為：

95℃預變性15min；95℃變性15s，60℃退火4min，14個循環；72℃延伸5-8min。

5.根據權利要求3或4所述的方法，其特征在于，鑒定PCR的反應以預擴增產物為模板，LSP為下游引物，ASP1/ASP2為上游引物，按照所使用的基因分型芯片所給出的程序進行SNP位點基因型鑒定。

6.一種檢測豬眼肌面積性狀的試劑盒，其特征在于，含有權利要求2所述的特異性引物。

7.權利要求1所述的SNP標志物或權利要求2所述的引物在豬育種中的應用。