[發明專利]假肥大型肌營養不良癥的檢測探針及其無創檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201410856009.2
• 申請日: 2014-12-31
• 公開（公告）號: CN104498614A
• 公開（公告）日: 2015-04-08
• 發明（設計）人: 尹鴻瑛;陶錦勝;吳春求;陳樣宜
• 申請（專利權）人: 廣州和泰科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 鄭瑩

1.一種檢測假肥大型肌營養不良癥的檢測探針為SEQ?ID?NO:1~?SEQ?ID?NO:546所示的核酸序列。

2.一種檢測假肥大型肌營養不良癥的核酸探針混合物，其特征在于：該核酸探針混合物含有核苷酸序列為SEQ?ID?NO:1~?SEQ?ID?NO:546所示的核酸探針。

3.一種檢測假肥大型肌營養不良癥的試劑盒，其特征在于：該試劑盒中含有核苷酸序列為SEQ?ID?NO:1~?SEQ?ID?NO:546所示的核酸探針。

4.一種檢測待測樣品中假肥大型肌營養不良癥相關核酸分子的核苷酸序列的方法，其特征在于：包括以下步驟：

1）基因組DNA文庫的構建：提取將待測樣品中的基因組DNA，并將其打斷成100～500bp大小的片段；將打斷后的雙鏈DNA?片段的兩端進行末端修復后，再連接上測序接頭；即可獲得DNA文庫；

2）DNA文庫的優化：將上述DNA文庫中帶有測序接頭的DNA?片段進行PCR擴增，獲得優化的DNA文庫；

3）第一次雜交捕獲靶序列：將優化的DNA文庫中的雙鏈DNA片斷變性后，利用權利要求1中所述的檢測探針SEQ?ID?NO:1～SEQ?ID?NO:546對其進行雜交捕獲靶序列；

4）靶序列洗脫和第一次PCR擴增：將上一步捕獲的靶序列進行洗脫，將洗脫下來的靶序列進行PCR擴增；

5）第二次雜交捕獲靶序列：將上一步PCR擴增后的靶序列進行變性后，再用權利要求1中所述的檢測探針SEQ?ID?NO:1～SEQ?ID?NO:546進行雜交捕獲；

6）靶序列洗脫和第二次PCR擴增：將上述第二次捕獲的靶序列進行洗脫，并將洗脫下來的靶序列進行第二次PCR擴增；

7）將上述第二次PCR擴增的產物進行測序，即可獲得與DMD相關的核酸分子序列；對該序列進行生物信息學分析，確定待測樣品中假肥大型肌營養不良癥相關核酸分子的突變情況；

上述方法用于非診斷目的。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：?步驟1）中所述測序接頭包括A接頭和P1接頭，其序列如下：

A接頭的序列為：

5'-CCATCTCATCCCTGCGTGTCTCCGACTCAGNNNNNNNNNNGAT-3'?（SEQ?ID?NO:547）；

3'-CGCACAGAGGCTGAGTCNNNNNNNNNNCTA-5'（SEQ?ID?NO:548）；

上述序列中的N代表A/G/C/T四種堿基的任意一種；

P1接頭的序列為：

5'-CCACTACGCCTCCGCTTTCCTCTCTATGGGCAGTCGGTGAT-3'?（SEQ?ID?NO:549）；

3'-TTGGTGATGCGGAGGCGAAAGGAGAGATACCCGTCAGCCACTA-5'（SEQ?ID?NO:550）。