[發明專利]用于中華鱘親子鑒定的SSR熒光標記引物及應用

有效

• 申請號: 201410854788.2
• 申請日: 2014-12-31
• 公開（公告）號: CN104498613A
• 公開（公告）日: 2015-04-08
• 發明（設計）人: 張書環;辛苗苗;危起偉
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院長江水產研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 王敏鋒

技術領域

本發明屬于水產養殖領域中的水產動物種質鑒定領域，具體涉及用于中華鱘親子鑒定的SSR熒光標記引物及應用。

背景技術

中華鱘(Acipenser?sinensis)，隸屬于鱘形目，鱘科，鱘屬，是一種在海洋中生長，淡水中繁殖的大型海河洄游性原始古魚類，至今存活已有1.4億年歷史。該物種主要分布在長江和珠江水系。目前珠江水系的中華鱘已基本絕跡。葛洲壩修建后，阻斷了中華鱘的繁殖洄游通道，再加上過度捕撈，水域污染，生境退化，長江中華鱘資源量也嚴重下降。2010年，中華鱘被列入瀕危物種保護紅皮書，是國家一級保護動物。

微衛星DNA(microsatellite)，又稱為簡單重復序列(Simple?Sequence?Repeats,SSR)，是指一類重復單位在2～6個堿基的重復序列。微衛星序列作為分子標記有諸多優點：在真核基因組中分布廣泛、等位基因多、雜合度高；擴增片段短、擴增率高；靈敏度比傳統的D?NA指紋高得多，由于其結果可靠，方法簡單，省時省力，在親子鑒定和遺傳多樣性研究中微衛星標記技術正在逐步取代其他分子標記技術。目前國內外的科研工作者已利用微衛星標記構建了人類、小鼠、大鼠及幾個植物等物種的染色體遺傳圖譜，并將微衛星標記廣泛應于基因定位及克隆、疾病診斷、親緣分析或品種鑒定、繁殖育種以及進化研究等領域。

目前，還沒有將微衛星分子標記應用到中華鱘的親子鑒定和遺傳管理的報道。本發明旨在利用微衛星熒光標記建立中華鱘親子鑒定技術，為中華鱘養殖場建立中華鱘家系譜系提供依據，以期合理的指導中華鱘人工繁殖。

發明內容

本發明的目的在于提供了用于中華鱘親子鑒定的SSR熒光標記引物，該引物可以用于中華鱘親子鑒定。

本發明的另一個目的在于提供了用于中華鱘親子鑒定的SSR熒光標記引物的應用。包括利用該引物制備成用于中華鱘親子鑒定的試劑盒，或利用該引物對中華鱘進行親子鑒定，或利用其進行種質鑒定和家系管理。

為了達到上述目的，本發明采取以下技術措施：

用于中華鱘親子鑒定的SSR熒光標記引物，具體如下：

Asi-75067F:AGAGTTCTCGAAGCGGAAACAG；R:CTGGTTCAAACTGGGAGCGAT

Asi-67648F:TCCGGTACTGGAAACCCTTG；R:ATTCGCCTGGAAGAGCACAC

Asi-67123F:AGCTAACAGCAGTGCATGGTATTT；R:CTTGAGATAAAAGGCGCTGTAGAG

Asi-73843F:GGTGTTTGAAAGACAGCGAGAA；R:TTCCTCCAGGACAGAGTTTGC

Asi-72040F:AGCAGAGTCCACATCCCCCT；R:GAGTGTCGCTCGAAAGCCCT

Asi-70421F:TGCCACAAATAAGATGCAGGAG；R:TTTTGCTTTGGAAACTGTACTGC

Asi-56700F:CAACCTCTTCACTACCGCAAAC；R:TGCAAAAAGGAATTGGAATCG

Asi-65194F:TACAAAATCGGCAGAAAGGCT；R:GCAGGCATGATGAGAATAGGC

Asi-77057F:GGGTCCCGCACAGTTTAAAG；R:GACGGCAAGGCAAGATAGGT

Asi-66034F:CCTACGCCAAGCTCAACCAG；R:ACCGCAGAGTCACGGAGTTG；

以上分子標記引物的正向引物標記常用的熒光染料，包括FAM、HEX、TAMRA、ROX等。用于中華鱘親子鑒定的SSR熒光標記引物的應用，包括制備中華鱘親子鑒定試劑盒，或利用該引物進行中華鱘的親子鑒定。

中華鱘親子鑒定方法包括：

提取待鑒定樣品DNA，使用本發明開發的10對SSR引物進行擴增。使用常規軟件統計等位基因數(Na)、期望雜合度(He)、排除概率(PE)以及累積排除概率(CPE)。

本發明提供的中華鱘親子鑒定試劑盒，其試劑盒包含10對中華鱘微衛星標記引物，以及10×PCR緩沖液，MgCl₂，dNTPs，rTaq?DNA聚合酶和雙蒸水。

與現有技術相比，本發明具有以下優點：