[發(fā)明專利]油茶良種長(zhǎng)林18號(hào)的分子特異性標(biāo)記引物及鑒定方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201410849334.6 | 申請(qǐng)日： | 2014-12-30 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN104673790A | 公開（公告）日： | 2015-06-03 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 李海波;王麗玲;徐梁;魏海龍 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 浙江省林業(yè)科學(xué)研究院 |
| 主分類號(hào)： | C12N15/11 | 分類號(hào)： | C12N15/11;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 杭州金道專利代理有限公司 33246 | 代理人： | 冷紅梅 |
| 地址： | 310023 浙江省*** | 國(guó)省代碼： | 浙江;33 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 油茶 良種 18 分子 特異性 標(biāo)記 引物 鑒定 方法 | ||
1.油茶良種長(zhǎng)林18號(hào)的分子特異性標(biāo)記引物，所述引物序列如下：
上游引物：5′-AGCGGCCGCGTAATAAGTCTAAGC-3′，
下游引物：5′-AGCGGCCGCGTTGGATCA-3′。
2.一種利用權(quán)利要求1所述的分子特異性標(biāo)記引物對(duì)油茶良種長(zhǎng)林18號(hào)進(jìn)行快速鑒定的方法，所述方法為：提取待測(cè)油茶品種葉片的基因組DNA作為模板，以所述分子特異性標(biāo)記引物作為擴(kuò)增引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測(cè)，若電泳結(jié)果出現(xiàn)549bp的特異DNA條帶，則待測(cè)油茶品種為油茶良種長(zhǎng)林18號(hào)，反之則否；所述分子特異性標(biāo)記引物序列為：
上游引物：5′-AGCGGCCGCGTAATAAGTCTAAGC-3′，
下游引物：5′-AGCGGCCGCGTTGGATCA-3′。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述PCR擴(kuò)增條件如下：94℃預(yù)變性4min；94℃變性40s，60℃退火40s，72℃延伸1min，共30個(gè)循環(huán)；最后于72℃補(bǔ)平7min，終止溫度為4℃。
4.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述方法如下：
(1)取待測(cè)油茶葉片，加液氮磨碎，以SDS-CTAB法提取待測(cè)油茶葉片的基因組DNA；
(2)以步驟(1)提取的基因組DNA為模板，以所述分子特異性標(biāo)記引物作為擴(kuò)增引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增：
PCR反應(yīng)體系每25μL組成如下：
ddH2O補(bǔ)足至25μL；
PCR反應(yīng)條件如下：
94℃預(yù)變性4min；94℃變性40s，60℃退火40s，72℃延伸1min，共30個(gè)循環(huán)；最后于72℃補(bǔ)平7min，終止溫度為4℃；
(3)取步驟(2)擴(kuò)增產(chǎn)物5μL，與1μL?0.25％溴酚蘭緩沖液混勻，點(diǎn)樣于1.5％的瓊脂糖凝膠上，于1×TAB緩沖液中、5V/cm電壓下電泳，電泳結(jié)束后EB染色，于自動(dòng)凝膠圖像分析儀上照相，若電泳結(jié)果出現(xiàn)549bp的特異DNA條帶，則待測(cè)油茶品種為長(zhǎng)林18號(hào)，反之則否。
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