[發明專利]一種用于肺癌組織分型的miRNA標志物及應用

在審

• 申請號: 201410848918.1
• 申請日: 2014-12-29
• 公開（公告）號: CN104726448A
• 公開（公告）日: 2015-06-24
• 發明（設計）人: 盧正斌
• 申請（專利權）人: 常州杰傲病理診斷技術有限公司
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 北京聯瑞聯豐知識產權代理事務所(普通合伙) 11411
• 代理人: 曾少麗

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種用于肺癌組織分型的miRNA標志物及應用。

背景技術

肺癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一,已成為我國城市人口惡性腫瘤死亡原因的第1位。非小細胞型肺癌包括鱗狀細胞癌(鱗癌)、腺癌、大細胞癌，與小細胞癌相比其癌細胞生長分裂較慢,擴散轉移相對較晚，非小細胞肺癌約占所有肺癌的80％，約75％的患者發現時已處于中晚期，5年生存率很低。其中，肺腺癌和肺鱗癌又是非小細胞肺癌中的兩種最常見的腫瘤。各病理類型的肺癌在腫瘤的生物學行為、對放療、化療及分子靶向藥物的敏感性等方面存在差異，各型預后也不相同。因此，在臨床上對肺癌作出診斷時，明確其病理分型對制訂治療方案、分析預后非常重要。

目前醫學界對肺癌的病理分型主要依靠微觀形態學及免疫組織化學方法。傳統的病理組織學方法是將獲取的病變組織通過固定、脫蠟、染色等步驟，制作成切片在在顯微鏡下分辨其微觀結構。該方法步驟繁多，需要白白等待一二天的時間，在病理學專業人員對切片進行判讀時也難免主觀性。因此，臨床上迫切的需要一種快捷、有限、準確的肺癌的病理分型方法。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：一種用于肺癌組織分型的miRNA標志物。

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案如下：一種用于肺癌組織分型的miRNA標志物，所述標記物包括miRNA-205、miRNA-21和miRNA-26b。

在本發明的第二方面，提供了上述miRNA標志物在制備肺癌組織分型試劑盒中的應用。

在本發明的第三方面，提供了一種肺癌組織分型試劑盒，其能夠測定組織中的miRNA-205、miRNA-21和miRNA-26b的含量。

在本發明的一個優選例中，上述試劑盒含有miRNA-205、miRNA-21和miRNA-26b的引物探針。

在本發明的一個優選例中，上述引物探針的序列如SEQ?ID?NO.1、SEQ?IDNO.2和SEQ?ID?NO.3所示。

在本發明的第四方面，提供了核苷序列如SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.2或SEQ?IDNO.3中的一種或多種組合物在制備肺癌組織分型試劑盒中的應用。

在本發明的一個優選例中，提供了序列如SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.2和SEQ?IDNO.3所示引物探針的用途，其用于制備肺癌組織分型試劑盒。

所述診斷試劑盒還可以包括PCR反應常用試劑，如Taq酶，逆轉錄酶，緩沖液，dNTPs，MgCl₂和DEPC水等；還可以含有標準品和/或對照品。

本發明的有益效果在于：首次發現了對肺癌組織分型具有極高診斷價值(AUC為1.000，敏感度和特異度分別為100％和100％)的生物標記物組合miRNA-205、miRNA-21和miRNA-26b；通過血漿miRNA標志物和診斷試劑盒的研制和應用，可以使得肺癌組織分型更加方便易行，為臨床醫生快速準確掌握患者病情，為提高臨床治療效果奠定基礎，并為發現具有潛在治療價值的新型小分子藥物靶標提供幫助。

附圖說明

圖1為肺腺癌與肺鱗癌腫瘤組織miRNA表達水平比較。

圖2為肺腺癌與肺鱗癌腫瘤組織miRNA表達水平ROC曲線。

具體實施方式

一、研究對象

病例組為2012年11月至2014年3月在常州市第二人民醫院收集的42例病例，均經病理組織學確診，采血前未經過手術和放化療。其中肺腺癌27例，肺鱗癌15例；按性別和年齡(±5歲)與病例進行頻數匹配。用于研究的樣本為同期收取，采樣、分裝、保存條件均一，通過對樣品資料的整理。

二、研究方法

(1)腫瘤組織石蠟包埋，切片。

(2)按照石蠟組織總RNA提取試劑盒(miRNeasy?FFPE?Kit，貨號NO.217504，德國Qiagen公司)說明書從石蠟組織中提取總RNA。