[發(fā)明專利]用于提高植物耐鹽性的編碼玉米HKT轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的基因ZmHKT1;1a及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410837383.8
• 申請(qǐng)日: 2014-12-29
• 公開（公告）號(hào): CN104593380A
• 公開（公告）日: 2015-05-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉允軍;任珍靜;王國(guó)英
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所
• 主分類號(hào): C12N15/29
• 分類號(hào): C12N15/29;C12N15/82;C12N1/21;C12N15/84;C07K14/415;A01H5/00
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.一種編碼玉米HKT轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的基因ZmHKT1；1a，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。

2.一種玉米HKT轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，其特征在于：

1)由SEQ?ID?NO:2所示的氨基酸序列組成，或

2)在SEQ?ID?NO:2所示的氨基酸序列中經(jīng)取代、缺失或插入一個(gè)或幾個(gè)氨基酸所獲得的具有同等活性的蛋白質(zhì)。

3.含有權(quán)利要求1所述基因ZmHKT1；1a的重組表達(dá)載體pCAMBIA3301-ZmHKT1；1a。

4.含有權(quán)利要求1所述基因ZmHKT1；1a的工程菌。

5.權(quán)利要求1所述的基因ZmHKT1；1a在轉(zhuǎn)化植物中的應(yīng)用。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用是在煙草內(nèi)轉(zhuǎn)化所述基因ZmHKT1；1a，提高煙草的耐鹽能力。

7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用的步驟包括：

從含有50μg/mL利福平的YEB平板上挑取農(nóng)桿菌EHA105單克隆，接種于50ml含50μg/mL利福平的YEB液體培養(yǎng)基中，200rpm，28℃培養(yǎng)至OD值為0.5，然后菌液冰浴30min，將菌液轉(zhuǎn)移至無(wú)菌的離心管中，4000rpm離心，收集菌液，將菌液懸浮于2mL預(yù)冷的含20％的甘油的100mMCaCl₂溶液中，200μL/管分裝，待用；取5μL的pCAMBIA3301-ZmHKT1；1a載體質(zhì)粒，加入200μL?EHA105感受態(tài)細(xì)胞中，混合均勻后，冰浴30min，液氮冷凍5min，37℃熱激5min，冰浴5min，加入800μL?YEB液體培養(yǎng)基，28℃200rpm搖床預(yù)培養(yǎng)4h，菌液涂板于含50μg/mL利福平+100μg/mL卡那霉素的YEB固體培養(yǎng)基上，28℃暗培養(yǎng)2天，挑取單克隆檢測(cè)，并選取陽(yáng)性克隆搖菌，用于轉(zhuǎn)化煙草；

用含50μg/mL利福平和100μg/mL卡那霉素的YEB液體培養(yǎng)基培養(yǎng)包含ZmHKT1；1a基因的植物表達(dá)載體的農(nóng)桿菌EHA105，以煙草葉片為外植體，采用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將從玉米中克隆得到的ZmHKT1；1a基因?qū)霟煵萑~片；取組培瓶中去掉葉緣和主脈的煙草植株頂端葉盤作為轉(zhuǎn)化受體，浸入備好的OD為0.6～0.8的農(nóng)桿菌菌液中感染10min，用無(wú)菌濾紙吸干葉盤表面的菌液后，轉(zhuǎn)入上面鋪一層無(wú)菌濾紙的MS基本培養(yǎng)基上，28℃暗培養(yǎng)3d，然后將材料轉(zhuǎn)入含有抗生素的分化培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)4代，兩周繼代一次，待分化出的抗性芽長(zhǎng)至2～3cm高時(shí)，切下小芽轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，初步獲得抗性植株。