[發明專利]一種檢測干酪乳桿菌菌株的方法及其試劑盒和引物對

有效

• 申請號: 201410837348.6
• 申請日: 2014-12-24
• 公開（公告）號: CN104450941A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發明（設計）人: 陳萬義;任婧;郭本恒;劉振民
• 申請（專利權）人: 光明乳業股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/245
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 朱水平;沈利

技術領域

本發明涉及生物領域，具體涉及一種檢測干酪乳桿菌菌株的方法及其試劑盒和引物。

背景技術

干酪乳桿菌(Lactobacillus?casei)屬于乳桿菌屬(Lactobacillus)，是革蘭氏陽性菌，不產芽孢，無鞭毛，不運動，兼性異型發酵乳糖，不液化明膠；最適生長溫度為37℃，G+C含量為45.6％～47.2％；菌體長短不一，兩端呈方形，常成鏈；菌落粗糙，灰白色，有時呈微黃色，能發酵多種糖。干酪乳桿菌存在于人的口腔、腸道內含物和大便及陰道中，也常常出現在牛奶和干酪、乳制品、飼料、面團和垃圾中。干酪乳桿菌是一種有益于人體健康的益生菌。2001年衛生部公布了可用于保健食品中的益生菌菌種名單，其中包括干酪乳桿菌及干酪乳桿菌干酪亞種(又叫副干酪乳桿菌)。目前我國對干酪乳桿菌的研究甚少。

干酪乳桿菌作為益生菌的一種，能夠耐受有機體的防御機制，其中包括口腔中的酶、胃液中低pH值和小腸的膽汁酸等。所以干酪乳桿菌進入人體后可以在腸道內大量存活，起到調節腸內菌群平衡、促進人體消化吸收等作用。同時，干酪乳桿菌具有高效降血壓、降膽固醇、促進細胞分裂，產生抗體免疫、增強人體免疫及預防癌癥和抑制腫瘤生長等功能；還具有緩解乳糖不耐癥、過敏等益生保健作用。近年來，由于干酪乳桿菌對其宿主營養、免疫、防病等具有顯著的益生功效，越來越成為人們研究、開發、生產的焦點。而高血壓人群的增加使得對干酪乳桿菌的研究以及用其開發功能性乳制品的意義顯得愈加重要。

干酪乳桿菌作為益生菌之一被用作牛奶、酸乳、豆奶、奶油和干酪等乳制品的發酵劑及輔助發酵劑，尤其在干酪中應用較多，為了適應干酪中的高含量鹽及低pH值，需要通過一些重要氨基酸的代謝以增加風味并促進干酪的成熟。近幾年來，干酪乳桿菌越來越多地用于乳制品中，但是其是否真正添加以及是否能夠存活于乳制品中則需要乳品檢測機構進行快速鑒定。傳統的檢測方法費時費力，通常需要3～5天才能確定。此外，傳統的檢測方法按照國標GB4789.35-2010的要求，所需的樣品量至少為25g或25mL，因此檢測的靈敏度通常＞4CFU/g或＞4CFU/mL，由上可知，傳統的乳制品中干酪乳桿菌的檢測方法其檢測效率較低，檢測成本較高。

發明內容

本發明要解決的技術問題在于克服現有傳統技術檢測時間長、費時費力、成本高的缺陷，提供一種檢測干酪乳桿菌菌株的方法及其試劑盒和引物。采用所述的方法檢測干酪乳桿菌，檢測速度快，成本低，靈敏度高，檢測結果特異性好，判定簡單易行，并且檢測食品中的干酪乳桿菌菌株也結果準確可靠。

本發明的目的是通過下列技術方案來實現的。

本發明采用的技術方案之一是：一種特異性擴增干酪乳桿菌的引物對，其核苷酸序列分別如序列表中SEQ?ID?NO.1所示和如序列表中SEQ?ID?NO.2所示。

其中，核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?NO.1所示的引物稱為SEN2-L；核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?NO.2所示的引物稱為SEN2-R。所述引物SEN2-L和引物SEN2-R所擴增的序列為干酪乳桿菌組氨酸激酶基因序列中的保守序列。

本發明采用的技術方案之二是：一種用于特異性擴增干酪乳桿菌的試劑盒，其包括核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?NO.1所示和如序列表中SEQ?ID?NO.2所示的引物對。

較佳地，所述的試劑盒中還包括dNTP、PCR緩沖液、Mg²⁺、Taq?DNA聚合酶和ddH₂O中的一種或多種；更佳地，所述的試劑盒還包括基因組DNA抽提試劑。

本發明采用的技術方案之三是：一種檢測干酪乳桿菌菌株的方法，其包括以下步驟：

(1)提取待檢樣品的基因組DNA作為模板，核苷酸序列分別為如序列表中SEQ?ID?NO.1所示和如序列表中SEQ?ID?NO.2所示的引物對作為引物，進行PCR擴增；

(2)檢測步驟(1)PCR擴增產物中是否在461bp位置存在單一擴增產物。