[發明專利]一種基于混合探針基因芯片檢測方法

無效

• 申請號: 201410833492.2
• 申請日: 2014-12-30
• 公開（公告）號: CN104561290A
• 公開（公告）日: 2015-04-29
• 發明（設計）人: 劉全俊;侯傳榮;于靜靜;余筠如;包鎮;汪榮亮;谷德健
• 申請（專利權）人: 東南大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 江蘇永衡昭輝律師事務所 32250
• 代理人: 王斌

1.一種基于混合探針基因芯片檢測方法，其特征在于，該方法包括以下幾個步驟：

步驟一：樣品制備

制備含有目的探針（3）的溶液，和第一熒光基團（1）標記的質量控制探針（4）的溶液；并將上述目的探針（3）的溶液和第一熒光基團標記（1）標記的質量控制探針（4）的點樣溶液充分混合，制備成點樣溶液；

步驟二：基因芯片制備

將上述混合后的溶液點樣于修飾了手臂分子（6）的基片（7）上形成N個探針斑點，N為自然數，經過固定并清除未固定的探針，完成基因芯片的制備；

步驟三：通過檢測質量控制探針（4）的信號檢測目的探針（3）通過手臂分子（6）固定在基片（7）上；

檢測上述所有探針斑點發出的熒光信號，若在第一熒光基團（1）的激發波長下檢測到熒光，則表示質量控制探針（4）通過手臂分子（6）固定在基片（7）上，同時說明目的探針（3）通過手臂分子（6）固定在基片（7）上；

否則，若任一個探針斑點中在第一熒光基團（1）的激發波長下未檢測到熒光，表示質量控制探針（4）未通過手臂分子（6）固定在基片（7）上。

2.根據權利要求1所述的基于混合探針基因芯片檢測方法，其特征在于，還包括以下步驟：

步驟四：雜交

將第二熒光基團（2）標記的待測序列（5）與質量合格基因芯片上所述的探針斑點中的目的探針（3）進行雜交，雜交后，目的探針（3）中的探針和待測序列（5）結合形成雜交產物；

步驟五：確定待測序列（5）的序列信息

對所述雜交產物進行熒光信號檢測，若在第二熒光基團（2）的激發波長下檢測到熒光，則確定目的探針（3）與待測序列（5）互補，并確定待測序列（5）的序列信息；

若在第二熒光基團（2）的激發波長下未檢測到熒光，則表示不能確定目的探針（3）與待測序列（5）互補，無法確定待測序列（5）的序列信息。

3.根據權利要求2所述的基于混合探針基因芯片檢測方法，其特征在于，所述的目的探針（3）和質量控制探針（4）為脫氧核糖核酸、核糖核酸或者肽核酸。

4.根據權利要求2所述的基于混合探針基因芯片檢測方法，其特征在于，所述的基片（7）為玻璃片、硅膠晶片、塑料、聚丙烯膜、硝酸纖維素膜、尼龍膜、微型磁珠或者管蓋。

5.根據權利要求2所述的基于混合探針基因芯片檢測方法，其特征在于，所述的第一熒光基團（1）和所述的第二熒光基團（2）不相同，且上述兩種熒光基團的熒光發射峰大于40nm。

6.根據權利要求5所述的基于混合探針基因芯片檢測方法，其特征在于，所述的第一熒光基團（1）和所述的第二熒光基團（2）為Cy3、Cy5、Fitc、FAM或者Rhodamine。

7.根據權利要求5所述的基于混合探針基因芯片檢測方法，其特征在于，所述的第一熒光基團（1）和第二熒光基團（2）為生物素-親和素與標記物質結合的標記復合物。

8.根據權利要求7所述的基于混合探針基因芯片檢測方法，其特征在于所述的標記物質為熒光蛋白、鐵蛋白、膠體金、熒光素或化學發光物質。