[發明專利]一種新疆出血熱病毒一步法核酸定量RT-PCR檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201410831389.4
• 申請日: 2014-12-23
• 公開（公告）號: CN105779646A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發明（設計）人: 遲大利;吳大治;夏懿
• 申請（專利權）人: 上海星耀醫學科技發展有限公司;上海復星醫藥（集團）股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種新疆出血熱病毒一步法核酸定量RT-PCR檢測試劑盒，其特征在于：本發明通過考察已知XHFV基因組全序列，并根據檢索所得XHFV不同基因亞型一致性保守序列設計出一對XHFV通用定量引物、一條XHFV特異性熒光探針，及一對內參特異性引物和一條內參探針，采用實時熒光定量PCR方法擴增目的基因。

2.權利要求1所述的新疆出血熱病毒一步法核酸定量RT-PCR檢測試劑盒，其特征在于：XHFV基因特異性定量序列和內參基因序列分別為：

〈SEQIDNo.1〉

5’-GTGCACAAAGCGCACAGATTGACACTGCTTTCAGCTCATACTATTGGCTTTACAAGGCTGGCGTGACTCCTGAAACCTTCCCGACGGTGTCACAGTTCCTCTTTGAGCTAGGGAAACAGCCAAGAGGTACCAAGAAAATGAAGAAGGCTCTTCTGAGCACCCCA-3’，

〈SEQIDNo.2〉

5’-CATTGCTTCCATTGATGGCTTAAAGGACACCACCAATTGGTTCCTCTCTGTGCACAGGCTAATTTTTTAGGGAAAATCTGGCCTTCCCACAAGGGGAGGCCAGGGAATTTTCTTCACGTGCGCTGCYGAAGATCAAA-3’，

XHFV一步法核酸定量RT-PCR檢測試劑盒中核酸定量擴增基因序列全長164bp，屬于核衣殼蛋白N結構基因區，為單拷貝序列；內參基因序列全長137bp，與XHFV核酸擴增基因序列有所不同。

3.如權利要求1所述的新疆出血熱病毒一步法核酸定量RT-PCR檢測試劑盒，一對XHFV核酸通用定量引物序列中的一條序列與SEQIDNo.1中所示的序列相同，另一條引物序列與SEQIDNo.1中所示的序列互補；XHFV核酸定量特異性探針與SEQIDNo.1中所示的序列相同；內參特異性引物序列中的一條序列與SEQIDNo.2中所示的序列相同，另一條引物序列與SEQIDNo.1中所示的序列互補；內參特異性探針與SEQIDNo.2中所示的序列相同。其中，所述的一對XHFV核酸通用定量引物，其序列可以選自SEQIDNo.3和SEQIDNo.4，

〈SEQIDNo.3〉為：5’-GTGCACAAAGCGCACAGATTGA-3’，

〈SEQIDNo.4〉為：5’-TGGGGTGCTCAGAAGAGCCTT-3’；

一對XHFV核酸通用定量引物序列也可以是上述序列向前或向后延伸10～20個核苷酸的序列，或者和上述序列同源性大于85％以上；所述的XHFV核酸定量特異性探針，可以選自SEQIDNo.5的序列，

〈SEQIDNo.5〉為：5’-FAM-CTTTCAGCTCATACTATTGGCTTTAC-BHQ-3’，

其中，探針5’-端標記FAM熒光基團，探針3’-端均標記淬滅基團。XHFV核酸定量特異性探針序列也可以是上述序列向前或向后延伸10～20個核苷酸的序列，或者和上述序列同源性大于85％以上；所述的一對內參特異性引物，其序列可以選自SEQIDNo.6和SEQIDNo.7，

〈SEQIDNo.6〉為：5’-CATTGCTTCCATTGATGGCTTA-3’，

〈SEQIDNo.7〉為：5’-TTTGATCTTCRGCAGCGCACG-3’；

一對內參特異性引物序列也可以是上述序列向前或向后延伸10～20個核苷酸的序列，或者和上述序列同源性大于85％以上；所述的內參特異性探針，可以選自SEQIDNo.8的序列，

〈SEQIDNo.8〉為：5’-JOE-CCACCAATTGGTTCCTCTCTGTGCAC-BHQ-3’，

其中探針5’-端標記JOE熒光基團，探針3’-端均標記淬滅基團。內參基因序列也可以是上述序列向前或向后延伸10～20個核苷酸的序列，或者和上述序列同源性大于85％以上。