[發明專利]一種制備恩拉霉素精粉的方法

有效

• 申請號: 201410828387.X
• 申請日: 2014-12-29
• 公開（公告）號: CN104402976A
• 公開（公告）日: 2015-03-11
• 發明（設計）人: 李國棟;趙明憲;辛貞;劉伯雅;黃苓
• 申請（專利權）人: 江西興鼎科技有限公司
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/18
• 代理公司: 江西省專利事務所 36100
• 代理人: 楊志宇

1.一種制備恩拉霉素精粉的方法，其特征為：

步驟如下：

（1）恩拉霉素發酵液先升溫至70℃，滅活30min，滅活后降溫至40-45℃，再依次添加兩種絮凝劑進行絮凝，處理完的發酵液進行板框過濾收集恩拉霉素菌絲體；

（2）恩拉霉素菌絲體用菌絲體浸提液進行浸提得到恩拉霉素浸提液；

（3）將恩拉霉素浸提液經大孔弱酸性陽離子交換樹脂吸附，用0.5mol/L鹽酸水溶液處理樹脂，并平衡柱子，用2mol/L氫氧化鈉溶液將恩拉霉素浸提液的pH值調至5.5，以1ml/min速率上樣，待流出液pH為5.3時不再上樣，改用2個柱體積的pH5.5的水溶液平衡柱子，再用0.5mol/L鹽酸水溶液洗脫，收集洗脫液；

（4）將濾液通過真空濃縮的方式去除丙酮和過多的水分，溫度控制在50-90℃，濃縮至濾液原體積的1/30-1/10，收集濃縮液；

（5）用堿溶液將濃縮液的pH值調至7-9，得到恩拉霉素晶體；

（6）反復用無菌純水和丙酮洗滌除去雜質，再干燥，即得恩拉霉素精粉。

2.如權利要求1所述的一種制備恩拉霉素精粉的方法，其特征為：步驟（1）中第一種絮凝劑為質量濃度為0.5%的殼聚糖溶液，用量為每立方米恩拉霉素發酵液添加0.5kg殼聚糖溶液；第二種絮凝劑為質量濃度為0.1%的聚丙烯酸鈉溶液，用量為每立方米恩拉霉素發酵液添加0.05-0.08kg聚丙烯酸鈉溶液。

3.如權利要求1所述的一種制備恩拉霉素精粉的方法，其特征為：步驟（2）中菌絲體浸提液為有機溶劑與鹽酸溶液按比例混合的溶液，有機溶劑為甲醇、乙醇、丙酮中的一種，菌絲體浸提液的體積比為有機溶劑：鹽酸：水=20:1:21，菌絲體浸提液用量為菌絲體重量的10-30倍。

4.如權利要求1所述的一種制備恩拉霉素精粉的方法，其特征為：步驟（3）中大孔弱酸性陽離子交換樹脂為724型、D113型、D152型中的一種。

5.如權利要求1所述的一種制備恩拉霉素精粉的方法，其特征為：步驟（5）中堿溶液為2mol/L氫氧化鈉溶液、2mol/L氫氧化鉀溶液、氨水中的一種或幾種。

6.如權利要求1所述的一種制備恩拉霉素精粉的方法，其特征為：步驟（6）的干燥過程為自然干燥、凍干或加熱烘干中的一種，其中加熱烘干溫度不超過50℃。

7.如權利要求1所述的一種制備恩拉霉素精粉的方法，其特征為：

步驟如下：

（1）恩拉霉素發酵液先升溫至70℃，滅活30min，滅活后降溫至42℃，再依次添加兩種絮凝劑進行絮凝，處理完的發酵液進行板框過濾收集恩拉霉素菌絲體；

（2）恩拉霉素菌絲體用菌絲體浸提液進行浸提得到恩拉霉素浸提液；

（3）將恩拉霉素浸提液經大孔弱酸性陽離子交換樹脂吸附，用0.5mol/L鹽酸水溶液處理樹脂，并平衡柱子，用2mol/L氫氧化鈉溶液將恩拉霉素浸提液的pH值調至5.5，以1ml/min速率上樣，待流出液pH為5.3時不再上樣，改用2個柱體積的pH5.5的水溶液平衡柱子，再用0.5mol/L鹽酸水溶液洗脫，收集洗脫液；

（4）將濾液通過真空濃縮的方式去除丙酮和過多的水分，溫度控制在70℃，濃縮至濾液原體積的1/20，收集濃縮液；

（5）用堿溶液將濃縮液的pH值調至8，得到恩拉霉素晶體；

（6）反復用無菌純水和丙酮洗滌除去雜質，再干燥，即得恩拉霉素精粉；

步驟（1）中第一種絮凝劑為質量濃度為0.5%的殼聚糖溶液，用量為每立方米恩拉霉素發酵液添加0.5kg殼聚糖溶液；第二種絮凝劑為質量濃度為0.1%的聚丙烯酸鈉溶液，用量為每立方米恩拉霉素發酵液添加0.07kg聚丙烯酸鈉溶液；

步驟（2）中菌絲體浸提液為有機溶劑與鹽酸溶液按比例混合的溶液，有機溶劑為丙酮，菌絲體浸提液的體積比為有機溶劑：鹽酸：水=20:1:21，菌絲體浸提液用量為菌絲體重量的20倍；

步驟（3）中大孔弱酸性陽離子交換樹脂為D113型；

步驟（5）中堿溶液為2mol/L氫氧化鈉溶液；

步驟（6）的干燥過程為加熱烘干，其中加熱烘干溫度不超過50℃。