[發(fā)明專利]大白菜抗根腫病CRb基因的連鎖分子標(biāo)記、引物及抗根腫病植株的選擇方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410828064.0
• 申請日: 2013-04-16
• 公開（公告）號: CN104726552B
• 公開（公告）日: 2017-05-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 樸鐘云;張騰;趙卓;陳慧慧;陳靜靜;張椿雨;李宏博;李海燕;李艷輝
• 申請（專利權(quán)）人: 沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 沈陽科威專利代理有限責(zé)任公司21101
• 代理人: 張述學(xué)

技術(shù)領(lǐng)域

本申請為原發(fā)明專利申請“大白菜抗根腫病CRb基因的連鎖分子標(biāo)記、引物及抗根腫病植株的選擇方法”的分案申請，其專利申請日：2013年4月16日；專利申請?zhí)枺?013101322309；發(fā)明創(chuàng)造名稱：大白菜抗根腫病CRb基因的連鎖分子標(biāo)記、引物及抗根腫病植株的選擇方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及與大白菜抗根腫病基因CRb緊密連鎖的分子標(biāo)記、引物序列以及篩選大白菜抗根腫病植株的方法。

背景技術(shù)

2002年，本課題組獲得了1份抗蕓薹根腫病的大白菜雙單倍體系‘CR Shinki DH’系，研究表明該抗病材料抗蕓薹根腫菌生理小種2、4和8（Piao等，Conversion of AFLP marker linked to clubroot resistance gene into SCAR marker. 2002，J Kor Soc Hort Sci 43:653–665）。進(jìn)一步研究證明抗根腫病基因為顯性單基因，并命名為CRb（Piao等，SCAR and CAPS mapping of CRb, a gene conferring resistance to Plasmodiophora brassicae in Chinese cabbage （Brassica rapa ssp. pekinensis），Theor Appl Genet，2004，108:1458-1465）。

在蕓薹種抗根腫病品種轉(zhuǎn)育過程中，每代都需要采用田間接種根腫病菌的方法鑒定中間材料的基因型，而且環(huán)境條件會影響到正確中間材料的選擇，這樣勢必影響轉(zhuǎn)育進(jìn)程，因此抗病品種轉(zhuǎn)育難的問題還沒有徹底解決。分子標(biāo)記輔助選擇技術(shù)（MAS）可能是最終解決這一問題的有效途徑。

目前，只有國內(nèi)沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)樸鐘云等（2004）獲得了與蕓薹種抗根腫病基因CRb連鎖的CAPS標(biāo)記。其中最近的兩個側(cè)翼標(biāo)記TCR05和TCR09，見（Piao等，SCAR and CAPS mapping of CRb, a gene conferring resistance to Plasmodiophora brassicae in Chinese cabbage（Brassica rapa ssp. pekinensis），Theor Appl Genet，108:1458-1465），但這些標(biāo)記與CRb的遺傳距離較遠(yuǎn)。因此，本實驗在這兩個CAPS標(biāo)記基礎(chǔ)上，開發(fā)與大白菜抗根腫病基因CRb緊密連鎖的標(biāo)記，精細(xì)定位該基因，從而簡化大白菜抗根腫病品種的轉(zhuǎn)育程序。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的是：

（1）提供與大白菜抗根腫病基因CRb緊密連鎖的分子標(biāo)記；

（2）提供由所述標(biāo)記的全長序列和PCR引物序列；

（3）提供在對大白菜抗根腫病基因進(jìn)行輔助選擇的過程中對上述標(biāo)記進(jìn)行應(yīng)用的方法。

（4）通過特異引物PCR擴(kuò)增可對待測植株進(jìn)行苗期鑒定，大大提高育種效率，縮短了育種進(jìn)程。

本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下：

1．與大白菜抗根腫病CRb基因緊密連鎖的分子標(biāo)記：TCR25、TCR108、TCR116、TCR30、TCR74分別具有如下核苷酸序列：

（1）TCR25（301bp）：

5’-CGTTTAAATTTGTTTATACGATGCAAATTCACTAGTTTATATGATATATATGTATACTATA TATATATTTGATATATATATATATATATATATATATTTGGATTGTAACCACCTCGAATTTTGAGATAATTATCATGTGAAAACGAAGACAAAAAAAAATTATGGGCATATTGATTGTATCTAATAAATTAATCATCCGATTAGTATATTCAAAATTAAAAAAAATCTTTATATTTTAAGAGAAATAGTGATAATGTCAAATATAACACACAAAAAAAATTCATATTCTGTTAATGGGACA-3’

（2）TCR108（1366bp）: