[發明專利]膀胱移行細胞癌細胞系BIU87特異性結合的多肽及其應用

在審

• 申請號: 201410824193.2
• 申請日: 2014-12-26
• 公開（公告）號: CN104593359A
• 公開（公告）日: 2015-05-06
• 發明（設計）人: 楊曉峰;張帆;羅俊茜
• 申請（專利權）人: 山西醫科大學第一醫院
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C07K7/06;A61K38/08;A61P35/00
• 代理公司: 太原晉科知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 14110
• 代理人: 王瑞玲

技術領域

本發明涉及生物技術領域，涉及篩選腫瘤組織特異性結合肽，具體為一種膀胱移行細胞癌細胞系BIU87特異性結合的多肽及其應用。

背景技術

膀胱癌（Bladder?carcinoma）是最常見的泌尿系統惡性腫瘤之一，其中75%-85%為淺表性膀胱腫瘤，又稱為非肌肉浸潤性腫瘤（Non?muscle?invasive?bladder?tumor，NMIBC）。雖然采取膀胱癌手術及術后綜合療法顯著提高了患者5年生存率，但因膀胱癌早期血尿常可自行減輕或停止，易給患者造成“好轉”或“治愈”的錯覺而貽誤治療。因此，針對膀胱原位癌診斷困難、術中腫瘤不易識別和術后需膀胱鏡復查的臨床問題，積極尋找特異性強、陽性率高、能識別微小腫瘤的腫瘤標志物將是改變膀胱癌診療現狀的有效手段之一。

噬菌體展示技術于1985年由Sminth等首次創造性的提出，現已成為發現新功能多肽和改變已有多肽性質的有效工具，廣泛應用于蛋白質工程和細胞生物學。其原理為通過將一定的外源蛋白質或多肽的基因表達產物融合到噬菌體衣殼蛋白PⅢ或PⅧ端,并在噬菌體顆粒表面展示該基因編碼的蛋白,同時將遺傳密碼信息整合到個體噬菌體的基因組中，從而在基因與蛋白質或多肽間建立直接聯系。1996年，Pasqualini等在噬菌體展示技術體外篩選的基礎上，發展了體內篩選方法。噬菌體展示技術體內篩選方法將噬菌體展示技術施以體內選擇壓力，進行腫瘤組織或其內部血管特異性配體的篩選,從而能夠獲得具有靶向作用的噬菌體表面展示的小分子多肽序列。因此，為實現膀胱癌微小腫瘤的分子診斷和靶向治療，采用體內噬菌體展示技術篩選人膀胱癌的特異性靶向多肽標志物，為膀胱癌早期診斷和靶向治療提供理論基礎。

目前，應用噬菌體展示技術體內篩選已得到針對不同腫瘤組織或血管的特異性靶向多肽配體，這些靶向多肽配體可顯示腫瘤組織或血管，或利用特異靶向多肽配體阻斷生長因子與受體結合，或攜帶細胞毒性藥物攻擊腫瘤組織，從而用于腫瘤診斷和治療。Lee等通過T7噬菌體展示肽庫篩選出人膀胱癌HT-1367細胞系特異性導向肽CSNRDARRC，并證實該肽對膀胱癌患者的尿液及病理組織有一定的結合特異性；趙揚等證明FITC標記肽CSNRDARRC可與膀胱癌T24細胞系及人膀胱癌患者病理組織相結合，但結合特異性有待提高。到目前為止未見有以人膀胱癌細胞BIU87為研究對象，并篩選出與其能進行特異性結合的多肽的報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種膀胱移行細胞癌細胞系BIU87特異性結合的多肽及其應用，利用噬菌體展示技術篩選得到特異性結合多肽NYZL1，經過鑒定，與人膀胱移行細胞癌細胞系BIU87有較強親和力和特異性。

本發明是采用如下技術方案實現的：一種膀胱移行細胞癌細胞系BIU87特異性結合的多肽，命名為NYZL1，編碼該多肽的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，即5′-GCAATGACGACCAATCGGCGACGAACA-3′。

一種膀胱移行細胞癌細胞系BIU87特異性結合的多肽，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示，即Cys?Ser?Ser?Pro?Ile?Gly?Arg?His?Cys。

一種膀胱移行細胞癌細胞系BIU87特異性結合的多肽在制備膀胱癌藥物中的應用。