[發明專利]鯉皰疹病毒3型囊膜蛋白ORF132的單克隆抗體、雜交瘤細胞株及其應用

有效

• 申請號: 201410823311.8
• 申請日: 2014-12-24
• 公開（公告）號: CN104450627A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發明（設計）人: 劉振興;柯浩;馬艷平;郝樂;馬江耀;梁志凌
• 申請（專利權）人: 廣東省農業科學院動物衛生研究所
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/08;G01N33/569;G01N33/577;C12R1/91
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 李海恬;萬志香

技術領域

本發明屬于免疫學領域，具體涉及一種鯉皰疹病毒3型囊膜蛋白ORF132的單克隆抗體、雜交瘤細胞株及其應用。

背景技術

鯉皰疹病毒3型(Cyprinid?herpesvirus?3,CyHV-3)又稱錦鯉皰疹病毒(Koi?Herpesvirus，KHV)，屬于皰疹病毒目(Herpesvirales)，異皰疹病毒科(Alloherpesviridae)，鯉皰疹病毒屬(Cyprinivirus)，是一種雙鏈線性DNA病毒，具有囊膜結構。該病毒嚴重威脅鯉(Cyprinus?carpio)及其觀賞品種：錦鯉，致死率高達80％-100％。鯉皰疹病毒3型基因組約295kb，編碼156個不同的ORF，目前已經確定其中的14個ORF編碼囊膜蛋白。囊膜蛋白位于病毒最外層，在病毒與宿主細胞的識別、互作以及入侵過程中發揮著重要作用，也是建立檢測方法和防治手段的重要靶分子。

ORF132是鯉皰疹病毒3型的一個高度保守并且特異的囊膜蛋白分子，也是病毒的一個結構蛋白(Michel?B,Leroy?B等，The?genome?of?cyprinid?herpesvirus3encodes?40proteins?incorporated?in?mature?virions,Journal?of?General?Virology,2010,91:452–462；Yi?Y,Zhang?H等，Extracellular?virion?proteins?of?two?Chinese?CyHV-3/KHV?isolates,and?identification?of?two?novel?envelope?proteins,Virus?Research，2014,191:108–116)，對其核苷酸序列和氨基酸使用NCBI?blast軟件在蛋白質數據庫和DNA數據庫進行在線分析顯示：ORF132是鯉皰疹病毒3型的特有基因，目前GenBank中已經登錄了4個毒株的ORF132序列，包括GZ11株，美國株(U)、以色列株(I)、日本株(J)，其中GZ11株、U株、J株的ORF132基因序列完全一致，與上述3個毒株相比，I株的ORF132基因存在一個堿基的差異：第17位堿基由T變為A，對應的第6位氨基酸由異亮氨酸(Ile)變為天冬酰胺(Asn)。根據文獻(劉振興，柯浩等，錦鯉皰疹病毒囊膜蛋白ORF132的克隆及分析，廣東農業科學，2011,6:134-136)報道，ORF132蛋白的97-170位氨基酸片段為主要B細胞表位區段，具有良好的免疫原性，并且該片段的氨基酸序列在已知的鯉皰疹病毒3型中完全一致，是一個理想的鯉皰疹病毒3型診斷靶位。

發明內容

本發明的目的在于提供一種分泌鯉皰疹病毒3型囊膜蛋白ORF132的單克隆抗體的雜交瘤細胞株4E11。

本發明還提供了由上述保藏編號為CCTCCNO：C2014172的雜交瘤細胞株制備的單克隆抗體。

本發明還提供了上述單克隆抗體在檢測鯉皰疹病毒3型上的應用。

本發明所采用的技術方案是：

一種分泌鯉皰疹病毒3型囊膜蛋白ORF132的單克隆抗體的雜交瘤細胞株4E11，已于2014年10月23日保藏于中國典型培養物保藏中心(CHINA?CENTER?FOR?TYPE?CULTURE?COLLECTION)，保藏編號為CCTCCNO：C2014172。

一種鯉皰疹病毒3型囊膜蛋白ORF132的單克隆抗體，由保藏編號為CCTCC?NO：C2014172的雜交瘤細胞株產生。

所述單克隆抗體為IgG1亞類。

一種檢測鯉皰疹病毒3型的試劑盒，含有保藏編號為CCTCCNO：C2014172的雜交瘤細胞株產生的鯉皰疹病毒3型囊膜蛋白ORF132的單克隆抗體。

本發明所述的分泌鯉皰疹病毒3型囊膜蛋白ORF132的單克隆抗體的雜交瘤細胞株4E11已于2014年10月23日保藏于國家知識產權局指定的保藏單位中國典型培養物保藏中心(CCTCC，地址：武漢大學)，保藏日期2014年10月23日，保藏編號CCTCCNO：C2014172。

本發明主要具有如下有益效果：

本發明通過發明人長期研究鯉皰疹病毒3型，選取了該病毒特有的，且具有較高的免疫原性的鯉皰疹病毒3型ORF132基因，通過大量的實驗研究，篩選到能穩定分泌鯉皰疹病毒3型囊膜蛋白ORF132的單克隆抗體的雜交瘤細胞株4E11。