[發明專利]一種鏈格孢菌J1311-1及其應用

在審

• 申請號: 201410819820.3
• 申請日: 2014-12-25
• 公開（公告）號: CN104593268A
• 公開（公告）日: 2015-05-06
• 發明（設計）人: 陳峻青;戚文秀;吉民;李黎
• 申請（專利權）人: 東南大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P3/00;C12R1/645
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 王艷

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種鏈格孢菌J1311-1及其應用。

背景技術

生物合成納米金方法具有原料來源廣泛、成本低廉、工藝簡單、反應條件溫和及產量高等特點，是一種清潔無毒的綠色合成方法。微生物是強大的綠色生物工廠，其合成的金納米顆粒具有尺寸可控、菌體產量高、不產生有毒副產物、室溫下高度穩定、生物相容性好等優點。

發明內容

發明目的：針對現有技術存在的不足，本發明的目的是提供一種鏈格孢菌J1311-1及其應用。該制備方法條件溫和，無需使用多種化學試劑，反應成本低，并具有環境友好性。本發明提供的鏈格孢菌可快速積聚金納米顆粒，其反應條件溫和，菌體收集方便，制備過程易于放大。

技術方案：為實現上述發明的目的，本發明采用的技術方案是：一種鏈格孢菌J1311-1，其特征在于，其分類命名為鏈格孢菌J1311-1（Alternaria?sp.?J1311-1），該菌株已于2014年7月3號保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC?No：M?2014310；保藏地址：湖北省武漢市武昌區武漢大學保藏中心(武漢大學第一附屬小學對面)。

該鏈格孢菌菌落初白色，漸變為灰褐色，菌絲稀疏，基質黑褐色。分生孢子梗單枝，長短不一，頂生不分枝，分生孢子有縱橫隔膜，倒棍棒形、卵形。

上述鏈格孢菌J1311-1的篩選方法如下：

1）取實驗室保藏的分離自東南大學校園土壤的35株真菌，分別在PDA固體培養基上于28℃培養3-5天；

2）將35株菌種分別接種于100mL馬鈴薯葡萄糖液體培養基，于28℃、150rpm培養2天得到菌體；

3）收集菌體并用無菌水洗滌，將20g濕菌體加入100ml無菌去離子水中，于28℃、pH?7、150rpm培養48h；

4）離心除去步驟3）中的菌體，收集上清液。將終濃度0.5-2.0?mmol/L的氯金酸溶液加入步驟4）的上清液中，于28℃、150rpm反應3-48h，根據反應后溶液的顏色判斷是否生成納米金（生成納米金的溶液為紫色至深紫色），對發生反應的體系重復篩選實驗并對生成的納米金進行確證；

5）收集步驟3）中的菌體，經無菌水洗滌后，將20g濕菌體加入100ml終濃度0.5-2.0?mmol/L的無菌氯金酸溶液中，于28℃、pH?7、150rpm反應3-48h，根據反應后菌體的顏色判斷其胞內是否生成納米金（生成納米金的細胞為紫色至深紫色），對發生反應的體系重復篩選實驗并對生成的納米金進行確證；將篩選得到的能夠生成納米金的菌株選取一株保藏，并命名為鏈格孢菌J1311-1。

上述的鏈格孢菌J1311-1在制備金屬納米材料方面的應用。

上述的鏈格孢菌J1311-1在制備納米金方面的應用。

上述鏈格孢菌J1311-1制備納米金的具體步驟如下：將鏈格孢菌J1311-1在PDA固體培養基上于28℃培養4天后，接種于100mL馬鈴薯葡萄糖液體培養基，于28℃、pH7、150rpm培養2天得到菌體；收集菌體，經無菌水洗滌后，將20g濕菌體加入100ml濃度0.5-2.0?mmol/L的無菌氯金酸溶液中，于28℃、pH?7、150rpm反應6h后，破碎菌體，收獲納米金顆粒。

上述納米金顆粒粒徑為30~40nm。

對于微生物合成納米材料的機制，一般認為是微生物產生的生物活性物質包括蛋白質、還原糖、還原性谷胱甘肽等可對金屬離子如金、銀、鎘、鈀、鉑等進行富集還原成納米材料，或將體系內的兩種金屬離子還原成納米合金，且生物分子對納米金屬的穩定起著重要作用。因此，本發明中的鏈格孢菌也可以具有將金、銀、鉻、鈀、鉑等離子還原組裝為納米粒子或合金的能力。

有益效果：與現有技術相比具有以下優點：本發明采用鏈格孢菌J1311-1制備納米金的方法，反應于常溫常壓進行，不使用多種化學試劑，反應成本低。制得的金納米顆粒可以在水中自主分散，常溫下穩定。本發明產生的金納米對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌具有一定的抑制活性。本發明可對相關行業的含金廢液及土壤作無害化處理并再生利用。

附圖說明

圖1為實施例1的鏈格孢菌J1311-1制備的金納米顆粒的效果圖；

圖2為實施例1的鏈格孢菌制備的金納米顆粒的掃描電鏡照片；

圖3為實施例1的鏈格孢菌制備的金納米顆粒的EDS譜圖；

圖4為實施例2的抑制大腸桿菌的效果圖；