[發(fā)明專利]一種鏈格孢菌J1311-1及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410819820.3
• 申請日: 2014-12-25
• 公開（公告）號: CN104593268A
• 公開（公告）日: 2015-05-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳峻青;戚文秀;吉民;李黎
• 申請（專利權(quán)）人: 東南大學(xué)
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P3/00;C12R1/645
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 王艷

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鏈格孢菌J1311-1及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

生物合成納米金方法具有原料來源廣泛、成本低廉、工藝簡單、反應(yīng)條件溫和及產(chǎn)量高等特點(diǎn)，是一種清潔無毒的綠色合成方法。微生物是強(qiáng)大的綠色生物工廠，其合成的金納米顆粒具有尺寸可控、菌體產(chǎn)量高、不產(chǎn)生有毒副產(chǎn)物、室溫下高度穩(wěn)定、生物相容性好等優(yōu)點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：針對現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本發(fā)明的目的是提供一種鏈格孢菌J1311-1及其應(yīng)用。該制備方法條件溫和，無需使用多種化學(xué)試劑，反應(yīng)成本低，并具有環(huán)境友好性。本發(fā)明提供的鏈格孢菌可快速積聚金納米顆粒，其反應(yīng)條件溫和，菌體收集方便，制備過程易于放大。

技術(shù)方案：為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明的目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種鏈格孢菌J1311-1，其特征在于，其分類命名為鏈格孢菌J1311-1（Alternaria?sp.?J1311-1），該菌株已于2014年7月3號保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC?No：M?2014310；保藏地址：湖北省武漢市武昌區(qū)武漢大學(xué)保藏中心(武漢大學(xué)第一附屬小學(xué)對面)。

該鏈格孢菌菌落初白色，漸變?yōu)榛液稚z稀疏，基質(zhì)黑褐色。分生孢子梗單枝，長短不一，頂生不分枝，分生孢子有縱橫隔膜，倒棍棒形、卵形。

上述鏈格孢菌J1311-1的篩選方法如下：

1）取實(shí)驗(yàn)室保藏的分離自東南大學(xué)校園土壤的35株真菌，分別在PDA固體培養(yǎng)基上于28℃培養(yǎng)3-5天；

2）將35株菌種分別接種于100mL馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基，于28℃、150rpm培養(yǎng)2天得到菌體；

3）收集菌體并用無菌水洗滌，將20g濕菌體加入100ml無菌去離子水中，于28℃、pH?7、150rpm培養(yǎng)48h；

4）離心除去步驟3）中的菌體，收集上清液。將終濃度0.5-2.0?mmol/L的氯金酸溶液加入步驟4）的上清液中，于28℃、150rpm反應(yīng)3-48h，根據(jù)反應(yīng)后溶液的顏色判斷是否生成納米金（生成納米金的溶液為紫色至深紫色），對發(fā)生反應(yīng)的體系重復(fù)篩選實(shí)驗(yàn)并對生成的納米金進(jìn)行確證；

5）收集步驟3）中的菌體，經(jīng)無菌水洗滌后，將20g濕菌體加入100ml終濃度0.5-2.0?mmol/L的無菌氯金酸溶液中，于28℃、pH?7、150rpm反應(yīng)3-48h，根據(jù)反應(yīng)后菌體的顏色判斷其胞內(nèi)是否生成納米金（生成納米金的細(xì)胞為紫色至深紫色），對發(fā)生反應(yīng)的體系重復(fù)篩選實(shí)驗(yàn)并對生成的納米金進(jìn)行確證；將篩選得到的能夠生成納米金的菌株選取一株保藏，并命名為鏈格孢菌J1311-1。

上述的鏈格孢菌J1311-1在制備金屬納米材料方面的應(yīng)用。

上述的鏈格孢菌J1311-1在制備納米金方面的應(yīng)用。

上述鏈格孢菌J1311-1制備納米金的具體步驟如下：將鏈格孢菌J1311-1在PDA固體培養(yǎng)基上于28℃培養(yǎng)4天后，接種于100mL馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基，于28℃、pH7、150rpm培養(yǎng)2天得到菌體；收集菌體，經(jīng)無菌水洗滌后，將20g濕菌體加入100ml濃度0.5-2.0?mmol/L的無菌氯金酸溶液中，于28℃、pH?7、150rpm反應(yīng)6h后，破碎菌體，收獲納米金顆粒。

上述納米金顆粒粒徑為30~40nm。

對于微生物合成納米材料的機(jī)制，一般認(rèn)為是微生物產(chǎn)生的生物活性物質(zhì)包括蛋白質(zhì)、還原糖、還原性谷胱甘肽等可對金屬離子如金、銀、鎘、鈀、鉑等進(jìn)行富集還原成納米材料，或?qū)Ⅲw系內(nèi)的兩種金屬離子還原成納米合金，且生物分子對納米金屬的穩(wěn)定起著重要作用。因此，本發(fā)明中的鏈格孢菌也可以具有將金、銀、鉻、鈀、鉑等離子還原組裝為納米粒子或合金的能力。

有益效果：與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明采用鏈格孢菌J1311-1制備納米金的方法，反應(yīng)于常溫常壓進(jìn)行，不使用多種化學(xué)試劑，反應(yīng)成本低。制得的金納米顆粒可以在水中自主分散，常溫下穩(wěn)定。本發(fā)明產(chǎn)生的金納米對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌具有一定的抑制活性。本發(fā)明可對相關(guān)行業(yè)的含金廢液及土壤作無害化處理并再生利用。

附圖說明

圖1為實(shí)施例1的鏈格孢菌J1311-1制備的金納米顆粒的效果圖；

圖2為實(shí)施例1的鏈格孢菌制備的金納米顆粒的掃描電鏡照片；

圖3為實(shí)施例1的鏈格孢菌制備的金納米顆粒的EDS譜圖；

圖4為實(shí)施例2的抑制大腸桿菌的效果圖；