[發明專利]抑制腫瘤生長與轉移的siRNA雙干擾組合物及其應用

在審

• 申請號: 201410816796.8
• 申請日: 2014-12-24
• 公開（公告）號: CN104531709A
• 公開（公告）日: 2015-04-22
• 發明（設計）人: 葛銀林;劉永超;薛美蘭;張金玉;鄭征
• 申請（專利權）人: 葛銀林;劉永超
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K31/713;A61P35/00
• 代理公司: 青島聯信知識產權代理事務所 37227
• 代理人: 高洋

技術領域

本發明涉及腫瘤治療藥物應用領域，特別涉及一種抑制乳腺癌腫瘤生長與轉移的siRNA雙干擾組合物及其應用。

背景技術

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，近年來包括中國在內的發展中國家女性乳腺癌的發病正呈明顯升高的趨勢。據統計2008年我國女性乳腺癌發病率約為47.64/10萬，居女性惡性腫瘤發病率的第二位，僅次于第一位的肺癌。當前乳腺癌腫瘤治療的方針是以手術及放療、化療為主，得益于乳腺癌防治知識的普及以及早期診斷技術的提高，乳腺癌致死率的增長趨勢近年來得以緩解，但是乳腺癌晚期及手術后的腫瘤轉移現象仍然不能完全避除，這大大影響了治療的預后及患者的生存質量，因此，探尋腫瘤轉移發生的機制，尋找有效的防止腫瘤轉移的方法已然成為解決乳腺癌腫瘤治療的當務之急。臨床研究表明，淋巴系統與早期乳腺癌轉移密切相關，淋巴轉移往往是乳腺癌轉移發生的第一個步驟。

淋巴管生長因子C(vascular?endothelial?growth?factor-C，VEGF-C)屬于VEGF家族的成員，由Joukov于1996年首次發現，是唯一特異性作用于脈管內皮細胞的生長因子。由于其在癌組織中大量表達，而且能促進腫瘤內新淋巴管的生成，因此被認為在腫瘤的淋巴轉移中起到關鍵作用。VEGF-C的受體為VEGFR-2與VEGFR-3，其中VEGFR-2結合VEGF-C后可以促進血管的生成，而VEGFR-3結合VEGF-C后可以誘導胞內的絲裂原活化蛋白酶(MAPK)與蛋白激酶B(Akt)發生磷酸化，從而保護內皮細胞免于凋亡，促進淋巴內皮細胞增殖與遷移，最終促進淋巴管的新生與腫瘤的淋巴管轉移。VEGF-C在乳腺癌、胃癌、宮頸癌、肺癌等腫瘤組織中高表達，能夠通過促進淋巴管的生成以及改變癌細胞的生物學性狀影響腫瘤疾病的進程。

細胞凋亡是一個多基因控制下的細胞自我滅亡過程，而Survivin?是乳腺癌腫瘤細胞避免凋亡的重要因素。survivin是凋亡抑制基因家族成員，是迄今為止發現的最強的凋亡抑制因子，在細胞生長發育中起到重要的作用。Survivin在分化成熟的正常組織中幾乎不表達，卻在胚胎期的臟器以及腫瘤組織中大量表達。Survivin可以作用于細胞的紡錘體微管，從而發揮抗凋亡作用，進而促進腫瘤細胞的分裂增殖和浸潤能力。Survivin還能保護腫瘤細胞并能夠增強腫瘤細胞的轉移，降低腫瘤細胞對化療藥物和放射的敏感性，其表達與腫瘤的惡性程度及病人的預后密切相關。

?????目前公開的均為單一抑制Survivin?表達的siRNA?分子，如專利號200910051374.0一種抑制Survivin?表達的siRNA?分子及其應用和專利號200910054393.3一種干擾Survivin?表達的siRNA?分子及其應用。?然而單一抑制靶向基因表達的應用有其使用的局限性，例如VEGF-C的抑制主要是針對腫瘤的淋巴轉移進行治療，雖然有報道稱VEGF-C對腫瘤具有一定的抑凋亡及促進生存的作用，但抑制VEGF-C所造成的促進腫瘤細胞凋亡及抑制增長的效果相對于survivin的抑制來講仍然不具有優勢。相反survivin的主要作用為抑制腫瘤細胞的凋亡以及促進腫瘤細胞的增長，同時也具有增強腫瘤細胞轉移的功能，但對于survivin單獨沉默而言，其抑制腫瘤細胞淋巴轉移的結果并不及VEGF-C的抑制。

發明內容

本發明針對現有技術中的不足，提供了一種包含靶向VEGF-C與靶向survivin的siRNA藥物組合物，以及該組合物在乳腺癌癥治療中的用途。

由于VEGF-C與survivin作為乳腺癌腫瘤治療的靶點均具有腫瘤的特異性，同時又具有腫瘤的普遍適宜性特點，應用小干擾RNA（siRNA）沉默VEGF-C與survivin的表達能夠有效的抑制腫瘤的生長與轉移，將VEGF-C-siRNA與survivin-siRNA組合應用，比單一的任何一種siRNA能夠更加有效的治療乳腺癌腫瘤疾病。進一步而言，針對不同的腫瘤類型以及病情發展狀況可以相應的調節本組合藥物中兩種siRNA的配比進行有側重的對癥治療。

本發明的技術方案是：

一種siRNA雙干擾組合物，包括寡聚核酸?VEGF-C-siRNA分子和寡聚核酸survivin-siRNA分子；所述寡聚核酸VEGF-C-siRNA分子的核苷酸序列，正義鏈為SEQ?ID?NO.1，反義鏈為SEQ?ID?No.2；所述寡聚核酸survivin-siRNA分子的核苷酸序列，正義鏈為SEQ?ID?NO.3，反義鏈為SEQ?ID?No.4。