[發明專利]一種降低人POKEMON基因表達的siRNA及其相關應用

在審

• 申請號: 201410814045.2
• 申請日: 2014-12-22
• 公開（公告）號: CN104611333A
• 公開（公告）日: 2015-05-13
• 發明（設計）人: 孔晶;柳曉平
• 申請（專利權）人: 淮陰工學院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K31/713;A61P35/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體地說涉及RNA干擾技術，更具體地涉及一種降低人POKEMON基因表達的小分子干擾核糖核酸(siRNA)。

背景技術

RNA干擾技術是一種新興的基因治療技術，又稱為基因敲低(knock-down)或基因沉默(gene?silencing)，其中siRNA(small?interfering?RNA)是最關鍵的效應分子，其具有21-23nt堿基的短片段雙鏈RNA分子，能夠以序列特異性地結合靶mRNA并使mRNA降解。能有效、特異地抑制細胞內基因的表達。由于RNA干擾具有高效、特異性，siRNA介導的轉錄后基因沉默是針對靶向基因的外顯子序列，對其啟動子或內含子序列卻沒有效應，是一種轉錄后基因表達調控機制，且不誘導非特異性的干擾素激活途徑，因而成為繼反義核普酸、核酶技術之后一種新的分析功能缺失表型的工具，為基因功能研究和基因治療開辟了新的道路，目前已廣泛用于抑制特定基因的表達研究，特別是靶向惡性腫瘤中高度表達基因的研究。

POKEMON是POK轉錄抑制因子家族成員之一，它包括一個氨基末端POZ/BTB結構域和羧基端Krüppel型鋅手指結構域，是T淋巴細胞、B淋巴細胞和紅細胞系發育和成熟的重要因子。研究結果顯示，POKEMON的作用位于許多腫瘤抑制基因和原癌基因的上游，通過ARF-HDM2-p53和Rb-E2F路徑對腫瘤發生發展進行調節，可使癌細胞獲得抗老化和死亡的能力，因此被稱為癌癥的“總開關”。因此，將其作為靶基因將有助于腫瘤的根治。POKEMON基因在乳腺癌、肝癌和淋巴瘤等腫瘤的異常表達在癌基因轉化和腫瘤的發生過程中發揮著重要的作用。重點是細胞內POKEMON基因的缺失不會對細胞的正常生長造成影響，這為設計低副作用的特異性抗癌藥物提供了可能。目前盡管早期癌癥患者進行了根治性切除和輔助治療，但仍具有很大的復發和轉移的風險。總體而言，約50％-60％的患者將最終發展為轉移性或晚期疾病，5年生存率小于5％。

發明內容

本發明的目的在于提供4對針對人POKEMON基因DNA片段的siRNA，能高效的抑制人POKEMON基因表達的小干擾核糖核酸。

本發明首先提供了一種降低POKEMON基因表達的小分子干擾RNA(siRNA)，包括正義鏈和反義鏈，序列如下：

siRNA1正義鏈：5’-CCCACCACAAACGUAGAAUUU-3’

反義鏈：3’-UUGGGUGGUGUUUGCAUCUUA-5’

siRNA2正義鏈：5’-GACCUUAAAUGAUUUCUGUUU-3’

反義鏈：3’-UUCUGGAAUUUACUAAAGACA-5’

siRNA3正義鏈：5’-CUGACGUGAAGAGGUCUUAUU-3’

反義鏈：3’-UUGACUGCACUUCUCCAGAAU-5’

siRNA4正義鏈：5’-CUCUGUGACACACACAUCUUU-3’

反義鏈：3’-UUGAGACACUGUGUGUGUAGA-5’

本發明所述小分子干擾RNA(siRNA)針對的POKEMON基因的靶序列如SEQ?ID?No.1-4所示。

SEQ?ID?No.1：AA?CCCACCACAAACGTAGAAT?CC

SEQ?ID?No.2：AA?GACCTTAAATGATTTCTGT?CT

SEQ?ID?No.3：TT?CTGACGTGAAGAGGTCTTA?GC

SEQ?ID?No.4：TT?CTCTGTGACACACACATCT?TC