[發明專利]用于在固體或半固體介質上表征微生物的方法

在審

• 申請號: 201410809237.4
• 申請日: 2015-08-05
• 公開（公告）號: CN104502317A
• 公開（公告）日: 2015-08-05
• 發明（設計）人: 約翰·沃爾什;瓊斯·海曼;瑟曼·索普
• 申請（專利權）人: 生物梅里埃有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 王思琪;鄭霞

1.一種在固體或半固體生長介質上表征和/或鑒定微生物的方法，該方法包括：

(a)在固體或半固體生長介質上探測一個或多個菌落，以生成所述菌落中微生物特有的內熒光(IF)測量結果；和

(b)基于內熒光(IF)測量結果表征和/或鑒定所述菌落中的微生物。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述菌落是具有小于50μm的直徑的微菌落。

3.根據權利要求1所述的方法，其中，在探測步驟(a)之前，使已知含有或疑似含有微生物的樣品在所述固體或半固體生長介質上生長，以生成至少一個菌落。

4.根據權利要求1所述的方法，其中所述探測步驟是非侵入性的。

5.根據權利要求1所述的方法，其中所述微生物被表征到一個或多個分類模型，所述分類模型選自由革蘭氏組、臨床革蘭氏組、治療組、功能組、和天然內熒光組組成的組。

6.根據權利要求1所述的方法，其中所述微生物被鑒定到屬級別、種級別、或菌株級別。

7.根據權利要求1所述的方法，其中所述IF測量結果通過光譜法產生，并且所述光譜法包括測定激發－發射矩陣(EEM)。

8.根據權利要求7所述的方法，其中將所述EEM與已知微生物的EEM的數據庫相比較。

9.根據權利要求7所述的方法，其中所述EEM包括至少2個不同的波長對。

10.根據權利要求7所述的方法，其中所述EEM使用多變量分析進行比較。

11.根據權利要求1所述的方法，所述方法還包括添加鑒定劑到所述固體或半固體生長介質或樣品中，并且其中所述鑒定部分地基于所述鑒定劑在所述菌落或從所述菌落回收的微生物中的存在和/或數量。

12.根據權利要求11所述的方法，其中所述鑒定劑是親和配體、抗體或其片段、核酸探針、抗生素、適體、肽模擬物、噬菌體來源的結合蛋白、凝集素、宿主防御肽、細菌素、噬菌體、染料，或其任何組合。

13.根據權利要求1所述的方法，其中所述固體或半固體生長介質包括一種或多種對所述微生物的生長有用的營養素以及一種或多種添加劑，其中所述一種或多種添加劑增強在所述固體或半固體生長介質上的所述微生物菌落的所述內熒光測量結果。

14.根據權利要求13所述的方法，其中所述一種或多種添加劑選自由以下組成的組：蛋白質水解產物、氨基酸、肉類和蔬菜提取物、糖源、緩沖劑、復蘇劑、生長因子、酶輔因子、礦物鹽、金屬補充物、螯合劑、光敏化劑、猝滅劑、還原劑、氧化劑、洗滌劑、表面活性劑、消毒劑、選擇劑和代謝抑制劑。

15.根據權利要求14所述的方法，其中所述還原劑是還原化合物。

16.根據權利要求1所述的方法，其中探測菌落包括測量落射熒光。

17.根據權利要求1所述的方法，其中探測菌落包括測量反射光。

18.一種檢測樣品中微生物的存在的方法，該方法包括：

(a)獲得已知含有或可能含有微生物的樣品；

(b)使樣品中存在的任何微生物在固體或半固體生長介質上生長；和

(c)通過對所述固體或半固體生長介質進行逐點掃描以生成內熒光(IF)測量結果，定位存在于所述固體或半固體生長介質上的任何菌落；

其中，按生成的測量結果所定位的一個或多個菌落的存在表明在樣品中存在微生物。

19.根據權利要求18所述的方法，其中所述IF測量結果通過光譜法產生，并且所述光譜法包括測定激發－發射矩陣(EEM)。

20.根據權利要求19所述的方法，其中所述EEM包括至少2個不同的波長對。