[發(fā)明專利]一種人類尿液中PCA3基因檢測(cè)方法和引物

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410808977.6
• 申請(qǐng)日: 2014-12-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104531863A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-04-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 錢學(xué)慶
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 錢學(xué)慶
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京和信華成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11390
• 代理人: 胡劍輝

1.一組特異性擴(kuò)增PCA3mRNA和PSA?mRNA的引物，其特征在于：包含2組檢測(cè)PCA3mRNA和PSA?mRNA的PCR擴(kuò)增核酸引物，長(zhǎng)度為18-26bp，且分別特異性地?cái)U(kuò)增出如SEQ?ID?NO:1所示的PCA3mRNA部分序列中第66位到148位核苷酸；和如SEQ?ID?NO:2所示的PSA?mRNA部分序列中第101位到第165位核苷酸；

用于擴(kuò)增PCA3mRNA的核苷酸擴(kuò)增引物如下：

正向引物：如SEQ?ID?NO:3所示；

反向引物：如SEQ?ID?NO:4所示；

熒光探針：如SEQ?ID?NO:5所示；

用于擴(kuò)增PSA?mRNA的核苷酸擴(kuò)增引物如下：

正向引物：如SEQ?ID?NO:6所示；

反向引物：如SEQ?ID?NO:7所示；

熒光探針：如SEQ?ID?NO:8所示。

2.一種人類尿液中PCA3基因檢測(cè)方法，其特征在于：使用權(quán)利要求1所述的引物對(duì)人類尿液細(xì)胞總RNA進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng)，通過(guò)反應(yīng)Ct值測(cè)定PCA3mRNA和PSA?mRNA表達(dá)水平。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測(cè)方法，其特征在于：包括步驟：尿液采集、保存、總RNA提取、PCA3熒光定量PCR反應(yīng)和結(jié)果分析。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)方法，其特征在于：包括步驟：

(1)在初段尿液收集前列腺細(xì)胞；

(2)離心收集尿沉渣，并加入Trizol試劑保存；

(3)用氯仿，異丙醇方法提取前列腺細(xì)胞中總RNA，經(jīng)乙醇洗滌，棄上清后干燥、溶解并測(cè)定濃度；

(4)經(jīng)過(guò)37℃逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)1小時(shí)，合成cDNA；

(5)用權(quán)利要求1所述的引物進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng)，通過(guò)反應(yīng)Ct值測(cè)定PCA3mRNA和PSA?mRNA表達(dá)水平；根據(jù)公式PCA3評(píng)分＝(PCA3mRNA/PSA?mRNA)X?1000計(jì)算測(cè)試樣品中尿PCA3分?jǐn)?shù)。

5.一種用于前列腺癌診斷的試劑盒，其特征在于：包含：

(1)收集含有前列腺細(xì)胞的尿沉渣的試劑和用具；

(2)尿液中總RNA提取試劑；

(3)檢測(cè)PCA3和PSA基因表達(dá)的試劑，其中含有權(quán)利要求1所述的引物；

(4)樣品中尿PCA3分?jǐn)?shù)的計(jì)算公式：PCA3評(píng)分＝(PCA3mRNA/PSA?mRNA)X?1000。