[發(fā)明專利]從絕經(jīng)婦女尿中提取尿促卵泡素的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410807922.3
• 申請日: 2014-12-23
• 公開（公告）號: CN104530217A
• 公開（公告）日: 2015-04-22
• 發(fā)明（設計）人: 劉冠男;劉君;孫延年
• 申請（專利權(quán)）人: 青島康原藥業(yè)有限公司
• 主分類號: C07K14/59
• 分類號: C07K14/59;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/14
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說涉及從絕經(jīng)婦女尿液中提取尿促卵泡素的方法。

背景技術(shù)

卵泡刺激素(促卵泡激素，follicle?stimulating?hormone，F(xiàn)SH)是由垂體前葉嗜堿性細胞合成和分泌的一種糖蛋白類促性腺激素，受下丘腦分泌的促卵泡激素釋放激素控制。?FSH具有調(diào)節(jié)機體的生長、性成熟和繁殖等作用，在生殖過程中起至關(guān)重要的作用。FSH可促使男性生精上皮發(fā)育、刺激精子發(fā)生和精子成熟;FSH對女性的功能為刺激卵泡發(fā)育、促使卵泡成熟、促進排卵，可刺激多個卵泡發(fā)育、抑制卵巢閉鎖、誘導芳香酶活性、刺激顆粒細胞增生及誘導黃體生成素(LH)和催乳素(PRL)受體產(chǎn)生。

在月經(jīng)周期中，血中FSH濃度及每日由尿排泄的卵泡刺激素的量隨周期變化而變化。在停經(jīng)后，血和尿中卵泡刺激素排出量增加。因此取自絕經(jīng)期婦女尿液制備尿促性素(亦稱為絕經(jīng)期尿促性腺激素，絕經(jīng)促性素，喜美康，絕經(jīng)后促性腺激素)，含促卵泡素(FSH)與黃體生成素(LH)，可分離得到高純化的尿促卵泡素。

FSH主要用于無排卵患者：包括對克羅米酚無反應的多囊卵巢綜合征患者。在輔助生殖技術(shù)中，如體外受精(IVF)、配子輸卵管內(nèi)移植(GIFT)及合子輸卵管內(nèi)移植(ZIFT)患者的超排卵。

用現(xiàn)有的方法提取尿促卵泡素是相當困難的。1988年06月切薩雷·西羅諾公司研究院公開了一種尿促卵泡激素的制備方法（88103966.7），其采用免疫層析和逆相HPLC從絕經(jīng)后的尿促性腺激素提取尿促卵泡素。1999年07月伊萊利利公司申請了FSH和FSH變體制劑,產(chǎn)品和方法（99808813.7），其是關(guān)于FSH制劑及其制劑的生產(chǎn)方法。上述關(guān)于FSH的生產(chǎn)方法成本高，不易操作，而本發(fā)明降低了生產(chǎn)成本，工藝簡單。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是從絕經(jīng)婦女尿液中提取尿促卵泡素。

本發(fā)明的技術(shù)方案是：利用高嶺土吸附，氨水脫附，丙酮沉淀析出將絕經(jīng)婦女尿中含有的尿促卵泡素提取出來，包括如下步驟：

（1）吸附工序：稱取合格尿液重量，過濾，調(diào)節(jié)尿液pH到3.5-5.0，加高嶺土，高嶺土與尿液的重量比為1:150-1:250，攪拌溶解2-4小時，調(diào)pH3.5-5.0；離心脫水，取白色沉淀物；用pH4.0-5.0的醋酸溶液洗滌二次，醋酸溶液與尿液的重量比為1:200-1:300，脫水，得高嶺土吸附物并稱其重量；

（2）脫附工序：?脫水后的高嶺土吸附物，加水溶解，水的體積與脫水后的高嶺土吸附物重量比為3:1-5:1；加20%-30%的氨水，加入氨水的體積與脫水后的高嶺土吸附物重量比為7:1-9:1，調(diào)節(jié)pH至10?-12，攪拌洗脫1-3小時；離心，取上層清液，調(diào)pH8.0±0.9，靜置1-3小時，離心取上清液；

（3）丙酮沉淀：上清液調(diào)pH4.5~5.5，加丙酮，加入的丙酮與上清液的體積比為1.5:1-3:1，放置10-18小時；虹吸棄去上層液體，過濾；

（4）干燥工序：將過濾物取出，干燥，將干燥物研磨成粉末即得粗制品，置干燥器中，陰涼處保存。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明。

實施例1

所述的利用高嶺土吸附，氨水脫附，丙酮沉淀析出將絕經(jīng)婦女尿中含有的尿促卵泡素提取出來，包括如下步驟：

1??吸附工序：

1.1?稱取合格尿液10噸，用二層紗布過濾，濾入陶瓷缸中；

1.2不斷攪拌，緩緩加入醋酸，調(diào)節(jié)尿液pH3.5，加入高嶺土67Kg，攪拌2小時，使高嶺土全部溶解。在攪拌的同時，測定pH，保持pH在3.5-4.0之間；

1.3?離心脫水，取白色沉淀物；

1.4?用pH4.0醋酸溶液50L，洗滌二次，脫水，得高嶺土吸附物106Kg。

2脫附工序：

2.1?將脫水后的高嶺土吸附物放在搪瓷桶中，加入318Ｌ水攪拌溶解；

2.2在4-8℃條件下，加2０%氨水742Ｌ，調(diào)節(jié)pH并保持在10.０-1０．５之間，攪拌洗脫60分鐘；

2.3??離心，取上層清液；

2.4??沉淀物按2.2，重復操作一次，得上層清液；

2.5??合并二次上清液，共1341Ｌ，用醋酸調(diào)pH8.０±0.３，靜置60分鐘，離心取上清液，將濾餅棄去；

3丙酮沉淀

3.1上清液用醋酸調(diào)pH4.8±0.３，加2012Ｌ丙酮，稍攪拌后，放置１０小時；