[發明專利]一種可應用于水中可生物降解有機物和微生物污染監測的混合菌劑及其制備方法

有效

• 申請號: 201410801866.2
• 申請日: 2014-12-22
• 公開（公告）號: CN104450587B
• 公開（公告）日: 2018-03-23
• 發明（設計）人: 張勝華;李晶晶;于鑫;葉成松;鞏松;李帥
• 申請（專利權）人: 中國科學院城市環境研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12Q1/02;C12R1/22;C12R1/01
• 代理公司: 北京風雅頌專利代理有限公司11403
• 代理人: 王安娜,李翔

技術領域

本發明涉及一種可應用于水中可生物降解有機物和微生物污染監測的混合菌劑及其制備方法，特別涉及該混合菌劑作為測試菌劑用于測定水源水和飲用水中的可生物降解有機物，能夠對水質微生物污染起到監測作用，屬于微生物學和環境監測領域。

背景技術

近年來，由于污染事故頻發和水源水的常態污染，我國的水源水和飲用水安全正面臨著嚴峻挑戰。在此形勢下，水源水和飲用水微生物污染的風險預警就顯得尤為重要。當水體中可供微生物利用的有機物超過一定濃度時，就會導致微生物過度生長，從而引發微生物污染事故。

水源水和飲用水中有機物種類繁多，其中能夠被異養菌無機化的部分稱為可生物降解有機物。可生物降解有機物與異養細菌在水體中的生長密切相關，是研究水源水和飲用水生物穩定性所要關注的重要的指標。目前，國內外對可生物降解有機物的測定主要有兩個方法：一類是在待測水樣中接入特殊細菌，通過平板計數法，測定結果被稱為可同化有機碳（AOC）；另一類方法通過測定水樣培養前后溶解性有機碳（DOC）的差值來確定水樣中可生物降解溶解性有機碳（BDOC）的值。這兩種方法從接種液的準備到整個測定過程的完成，需要花費20-30天，耗時較長，使得測定結果缺乏時效性，對水質微生物污染爆發的預警作用不大。

因此，很有必要開發一種新的測定方法和相應的菌劑替代現有的測定方法，提高測定結果的時效性，加強對水質微生物污染的監測。

發明內容

本發明的目的是提供一種可應用于水中可生物降解有機物和微生物污染監測的混合菌劑，適用于對地表水、地下水、水源水和微污染水中含有的可生物降解有機物進行測定，進而預警水源水和飲用水微生物污染事故爆發的可能性。

本發明提供了一種混合菌劑，該菌劑的活性成分為克雷伯氏菌（Klebsiella sp.）、氣單胞菌（Aeromonas sp.）、叢毛單胞菌（Comamonas sp.）、寡養單胞菌（Stenotrophomonas sp.）、不動桿菌（Acinetobacter sp.）、微桿菌（Exiguobacterium sp.）和希瓦氏菌（Shewanella sp.）的一株或幾株細菌的組合，每株細菌10-100份。

該發明的混合菌劑的所有菌株均是由發明人將某生活污水處理廠二次沉淀池的活性污泥通過馴化培養后分離篩選獲得的。這些菌株的具體信息如下：克雷伯氏菌（Klebsiella sp.）的保藏號為CCTCC M 2014600，氣單胞菌（Aeromonas sp.）的保藏號為CCTCC M 2014601，叢毛單胞菌（Comamonas sp.）的保藏號為CCTCC M 2014602，寡養單胞菌（Stenotrophomonas sp.）的保藏號為CCTCC M 2014603，不動桿菌（Acinetobacter sp.）的保藏號為CCTCC M 2014604，微桿菌（Exiguobacterium sp.）的保藏號為CCTCC M 2014605，希瓦氏菌（Shewanella sp.）的保藏號為CCTCC M 2014606。

該混合菌劑可用于快速測定水樣中的可生物降解有機物濃度，其檢測的基本原理：通過微生物利用水體中的可生物降解有機物時消耗的溶解氧濃度與可生物降解有機物濃度成正相關的關系。通過測定已知濃度的標準碳溶液（常用乙酸碳溶液）加入一定量微生物后溶解氧濃度的變化，就可以繪制出溶解氧消耗速率與乙酸碳濃度相關的標準曲線。再將待測水樣加入同等量微生物后的溶解氧消耗速率代入標準曲線擬合的方程，就可以計算出待測水樣的可生物降解有機物濃度。

該混合菌劑制備的簡要過程如下：（1）分別培養每株細菌；（2）離心收集菌體；（3）反復離心清洗菌體；（4）按一定比例混合菌體；（5）按比例加入凍干保護劑；（6）冷凍干燥處理（7）低溫保存混合凍干菌劑。

該混合菌劑未使用時，可保存于4℃或-20℃的低溫冰箱內。使用時，將其取出，加入一定體積無碳水配制的磷酸鹽緩沖溶液，置于25-28℃的恒溫箱1-2小時，使菌體復蘇后使用。