[發(fā)明專利]一種與谷氨酸脫氫酶65抗體特異結(jié)合的抗原蛋白質(zhì)

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410798020.8
• 申請(qǐng)日: 2014-12-18
• 公開（公告）號(hào): CN104558135B
• 公開（公告）日: 2018-05-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何海華;戚永躍;任印玲;吳森仁;袁錦云;李武
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳市新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程股份有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/435
• 分類號(hào): C07K14/435;C12N15/12;G01N33/68
• 代理公司: 北京聿宏知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11372
• 代理人: 吳大建;陳偉

本發(fā)明涉及抗原?抗體蛋白質(zhì)的技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及用于檢測(cè)糖尿病的截短的谷氨酸脫氫酶65(GAD65)技術(shù)領(lǐng)域。目的之一是篩選出與谷氨酸脫羧酶65抗體特異結(jié)合的截短的抗原蛋白質(zhì)。目的之二是開發(fā)能滿足化學(xué)發(fā)光封閉系統(tǒng)的抗原蛋白，并應(yīng)用于化學(xué)發(fā)光封閉系統(tǒng)。提供了與谷氨酸脫氫酶65抗體特異結(jié)合的抗原蛋白質(zhì)，該抗原蛋白質(zhì)選自如GAD65中第200?585、245?585、110?585、130?585、150?585、160?585、180?585、46?585、66?585或90?585位的截短蛋白質(zhì)中的一種。還提供了納米磁珠包被的上述截短蛋白質(zhì)或GAD65全長(zhǎng)蛋白質(zhì)以及包括上述蛋白質(zhì)的試劑盒。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及抗原-抗體蛋白質(zhì)的技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及用于檢測(cè)糖尿病的截短的谷氨酸脫羧酶65(GAD65)的技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

糖尿病是一種因胰島素分泌絕對(duì)或相對(duì)不足而引起的高血糖癥為主要特征的代謝性疾病，受多種遺傳和環(huán)境因素影響。按照1997年美國糖尿病協(xié)會(huì)及1999年世界衛(wèi)生組織(WHO)關(guān)于糖尿病分類及診斷標(biāo)準(zhǔn)，糖尿病可分為I型、II型、特殊類型糖尿病和妊娠糖尿病。

在1型糖尿病的免疫破壞期間，患者體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生多種針對(duì)胰島細(xì)胞自身抗原的自身抗體。自20世紀(jì)70年代以來，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了多種胰島素自身抗體，例如：胰島細(xì)胞抗體(ICA)、胰島細(xì)胞表面抗體(ICSA)、胰島素抗體(IAA)、熱休克蛋白抗體(HSP)、谷氨酸脫羧酶65(GAD65，哺乳動(dòng)物中GAD的存在形式之一)抗體、蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶抗體(IA-2A)等。目前臨床上在診斷1型糖尿病常用的指標(biāo)包括ICA、IAA、GADA、IA-2A。

目前臨床上體外診斷1型糖尿病指標(biāo)所用的平臺(tái)都基于放免或酶聯(lián)免疫技術(shù)(ELASA)，自身免疫性1型糖尿病診斷試劑在敏感性和特異性方面有待于進(jìn)一步改進(jìn)。傳統(tǒng)的放射免疫或者ELISA方法檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，至少6個(gè)小時(shí)，甚至過夜反應(yīng)才能完成測(cè)試，主要依靠純手工加樣等系列操作，效率低，特異性不足。化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)有高靈敏度、高特異性的優(yōu)勢(shì)，檢測(cè)結(jié)果時(shí)間快、效率高，全程全自動(dòng)儀器自動(dòng)操作，1個(gè)小時(shí)即可完成測(cè)試，對(duì)現(xiàn)在醫(yī)院的及時(shí)診斷治療起非常大的作用。

隨著敏感性和特異性更高的化學(xué)發(fā)光技術(shù)在體外診斷中的應(yīng)用，開發(fā)能適用于化學(xué)發(fā)光封閉系統(tǒng)的抗原變得尤其重要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一是篩選出與谷氨酸脫羧酶65抗體特異結(jié)合的截短的抗原蛋白質(zhì)。目的之二是開發(fā)能滿足化學(xué)發(fā)光封閉系統(tǒng)的抗原蛋白，并應(yīng)用于化學(xué)發(fā)光封閉系統(tǒng)。

截短的抗原蛋白質(zhì)的表達(dá)與全長(zhǎng)蛋白質(zhì)的表達(dá)相比，截短后的蛋白更容易表達(dá)，表達(dá)量更高；在用于檢測(cè)糖尿病時(shí)，其與全長(zhǎng)蛋白質(zhì)相比，截短后的蛋白靈敏度更好；非特異性更低。

本發(fā)明提供了一種與糖尿病特定抗體特異結(jié)合的抗原蛋白質(zhì)，所述抗原蛋白質(zhì)選自如SEQ ID NO:21中的第200-585、245-585、110-585、130-585、150-585、160-585、180-585、46-585、66-585和90-585位的截短蛋白質(zhì)中的一種。

在一個(gè)具體的實(shí)施例中，所述抗原蛋白質(zhì)選自如SEQ ID NO:21中的第110-585、130-585、150-585、160-585、180-585、46-585、66-585和90-585位的截短蛋白質(zhì)中的一種。

在一個(gè)具體的實(shí)施例中，所述抗原蛋白質(zhì)選自如SEQ ID NO:21中的第46-585、66-585和90-585位的截短蛋白質(zhì)中的一種。

在一個(gè)具體的實(shí)施例中，所述融合抗原蛋白質(zhì)為真核表達(dá)系統(tǒng)獲得的蛋白質(zhì)。