[發(fā)明專利]一種慈姑組培苗快速繁殖方法及培養(yǎng)基

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410795962.0
• 申請日: 2014-12-19
• 公開（公告）號: CN104542277A
• 公開（公告）日: 2015-04-29
• 發(fā)明（設計）人: 高美萍;陳麗娟;江文;韋紹龍;蔡炳華;唐軍;桂杰;何芳練;楊柳;董偉清;閉志強;歐昆鵬
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學院生物技術研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產(chǎn)權代理有限公司 11279
• 代理人: 王正茂

技術領域

本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術領域，涉及一種慈姑組培苗快速繁殖方法及培養(yǎng)基。

背景技術

慈姑(Sagittaria?trifoliaL.)屬澤瀉科慈姑屬多年生水生草本植物，以其球莖供食用,為冬春蔬菜供應淡季的主要水生蔬菜之一。慈姑具有較高的藥用和保健價值，性味苦甘、微寒、無毒，有涼血、止血、解毒、消腫之功效。產(chǎn)品主要出口銷往東南亞國家，近幾年國內(nèi)外市場銷量大增，產(chǎn)品供不應求，種植慈姑已成為農(nóng)民增收有效途徑之一。

目前慈姑生產(chǎn)上多采用可食用球莖無性繁殖，用種量大,成本高，且球莖不耐儲存。慈姑組織培養(yǎng)僅有初步的研究報道，目前主要采用傳統(tǒng)的固體培養(yǎng)基培養(yǎng)，操作過程中需要大量的手工勞動，而且由于慈姑的內(nèi)生菌污染十分嚴重,繼代培養(yǎng)2～3次后仍不斷出現(xiàn)污染,增殖率低，不利于慈姑的快速繁殖。可見，降低慈姑內(nèi)生菌污染是一個亟待解決的難題。

間歇浸沒式生物反應器主要是利用液體培養(yǎng)基以經(jīng)過過濾的空氣壓力為動力對植物組培苗進行間歇式的浸沒培養(yǎng)，這種培養(yǎng)方式減少培養(yǎng)環(huán)節(jié)，同時減少人工耗費，降低生產(chǎn)成本，基于這種優(yōu)勢，國內(nèi)外利用間歇浸沒式生物反應器進行研究的植物種類不斷增多，但是目前尚未有使用間歇浸沒式生物反應器進行慈姑組織培養(yǎng)的報道。

發(fā)明內(nèi)容

針對上述技術問題，本發(fā)明的發(fā)明人經(jīng)過創(chuàng)造性的勞動，發(fā)明了一種慈姑組培苗快速繁殖方法及培養(yǎng)基，該方法利用間歇浸沒式生物反應器及相應的培養(yǎng)基配方進行慈姑的組織培養(yǎng)，污染率低，增殖率高。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種慈姑組培苗快速繁殖方法，該方法使用間歇浸沒式生物反應器進行慈姑的組織培養(yǎng)，包括以下步驟：

(1)取慈姑外植體，經(jīng)脫毒后在固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)3周，再接種入間歇浸沒式生物反應器中；

(2)利用間歇浸沒式培養(yǎng)方法，使用液體繼代培養(yǎng)基對慈姑組培苗進行培養(yǎng)；其中，所述液體繼代培養(yǎng)基的配方為：MS+NAA?0.3～1.0mg/L+6-BA1.0～2.5mg/L，pH值為5.0～5.4。

優(yōu)選地，步驟(1)中所述的慈姑外植體為慈姑匍匐莖莖尖,長度為1～2cm。

優(yōu)選地，步驟(1)中所述的慈姑外植體的脫毒方法為：將慈姑外植體浸沒于含洗衣粉水中，沖洗30min，晾干后，用75％乙醇30s，0.1％升汞10min消毒，后用無菌水沖洗3～5次。

優(yōu)選地，步驟(1)中所述的固體培養(yǎng)基配方為：MS+6-BA?2.0mg/L+NAA0.5mg/L，固體培養(yǎng)基中蔗糖濃度為30g/L，瓊脂3.8g/L，pH值為5.8～6.2；脫毒后的慈姑外植體在固體培養(yǎng)基中的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度25～28℃，光照10h/d,黑暗14h/d，光照強度1000～1500lx。

優(yōu)選地，在步驟(1)中，將脫毒后的慈姑外植體在固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)3周后，接入間歇浸沒式生物反應器中，接種密度是8～15株/L。

優(yōu)選地，在步驟(2)中所述的液體繼代培養(yǎng)基的配方為：MS+NAA?0.5mg/L+6-BA?2.5mg/L，pH值為5.0～5.4。

優(yōu)選地，在步驟(2)中，間歇浸沒式培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為：每8小時浸沒20分鐘，浸沒的同時保持持續(xù)輸入過濾空氣，連續(xù)培養(yǎng)6周。

優(yōu)選地，在步驟(2)中，間歇浸沒式培養(yǎng)的環(huán)境條件為：光照強度1800lx，光照20h/d，黑暗4h/d，充氣泵氣壓0.05～0.08Mpa，溫度28±2℃。

本發(fā)明還提供了一種慈姑組培苗間歇浸沒式培養(yǎng)的液體繼代培養(yǎng)基，該液體繼代培養(yǎng)基的配方為：MS+NAA?0.3～1.0mg/L+6-BA?1.0～2.5mg/L，pH值為5.0～5.4；進一步地，所述液體繼代培養(yǎng)基的配方優(yōu)選為：MS+NAA?0.5mg/L+6-BA?2.5mg/L，pH值為5.0～5.4。

本發(fā)明通過以上技術方案，實現(xiàn)了以下有益效果：

(1)本發(fā)明的液體繼代培養(yǎng)基不添加糖，并將pH值調(diào)整至5.0～5.4；相比添加糖的傳統(tǒng)培養(yǎng)基，本發(fā)明的培養(yǎng)基降低了污染率，同時由于pH值相比傳統(tǒng)的培養(yǎng)基偏酸性，有利于抑制細菌的生長，但不影響植株的生長；本發(fā)明減少了人工操作，降低了人工操作過程中的人為污染；通過以上方式，使慈姑組培苗污染率降低至16％，大大低于傳統(tǒng)組培方法的慈姑組培苗污染率60％；