[發明專利]沉默神經系統CNN3基因表達的shRNA分子及其應用

有效

• 申請號: 201410794941.7
• 申請日: 2014-12-18
• 公開（公告）號: CN104593370B
• 公開（公告）日: 2018-06-15
• 發明（設計）人: 韓雁冰;孫俊梅;龍晶晶;李文亮;罕園園;陸地;郭家智;邊立功;韓冰冰;蔡雪梅
• 申請（專利權）人: 昆明醫科大學第一附屬醫院;昆明醫科大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K48/00;A61P25/08
• 代理公司: 昆明正原專利商標代理有限公司 53100
• 代理人: 陳左

本發明提供了一種沉默神經系統CNN3基因表達的shRNA分子，沉默神經系統CNN3基因表達的shRNA分子，包括正義鏈和反義鏈，所述正義鏈的核苷酸序列如序列表SEQ NO.4所示，所述反義鏈的核苷酸序列如序列表SEQ NO.5所示，構建了含有此shRNA分子的慢病毒載體，為研究癲癇發病機制與治療的潛在關系打下基礎，有利于在癲癇病治療中的應用。經在動物大腦微量注射入攜帶本發明所述干擾序列2shRNA分子的慢病毒載體，其表達蛋白calponin?3表達量下降80.65%。

技術領域

本發明涉及一種shRNA分子，特別涉及一種沉默神經系統CNN3基因表達的shRNA分子及其應用。

背景技術

癲癇是神經科常見的慢性疾病，主要表現為反復的癲癇發作，嚴重影響患者及其家屬的工作及生活質量。而在新診斷的癲癇患者中，約20～40％的患者最終成為難治性癲癇。目前，對于癲癇發生后腦組織內發生的生化改變和演變成為耐藥性癲癇的分子機制均不清楚，嚴重制約著難治性癲癇的防治。

異常神經網絡是難治性癲癇形成的重要環節，以往的研究主要集中在反復癲癇發作后繼發的苔蘚纖維芽生導致異常神經網絡形成。最近幾年，學術界開始注意到突觸在神經異常網絡中所起的作用。神經元高度同步化異常放電是癲癇發作的根本原因，但起步神經元要引起成千上萬神經元的高度同步化異常放電就必須將異常信號向特定功能區放大、傳播，而突觸作為信號傳遞的主要結構在這種異常神經信號的擴布中起著非常重要的作用。突觸是神經元相互聯系、傳遞信息、構成功能性網絡的結構基礎，癲癇腦內形成的異常神經網絡主要源于突觸的重組。突觸可分為前膜、后膜。樹突棘構成了哺乳動物腦內近90％的興奮性谷氨酸能突觸的突觸后部分。樹突棘是從神經元樹突發出的小突起，內含豐富的肌動蛋白，是腦內信息處理和存儲的重要部位，它的結構和功能會隨著突觸活動的變化改變，即具有可塑性。近年有學者提出樹突棘病變是癲癇發生的原因之一，癲癇發作時突觸傳遞活動的變化可使樹突棘重塑，后者又導致新的突觸形成或原有突觸消失。癲癇發作引起的樹突棘重塑有可能參與了異常神經網絡的形成。

作為腦內興奮性沖動傳入的主要接受者，樹突棘的形態被認為可以反映興奮性沖動的強度。更特別的是，樹突棘是一種具有高度活動性的結構，它像菌絲一樣不停移動。樹突棘的延伸和回縮，影響著興奮性突觸的形成或消失。人CNN3基因于1995年首次被檢出，定位于染色體1p21-22，編碼calponin-3蛋白。Calponin-3蛋白又名酸性calponin，是肌動蛋白結合蛋白，分子量為36.412KDa，屬于calponin家族。Calponin有3個亞型，只有calponin-3主要在腦內表達。在生理狀態下，calponin-3主要在神經膠質細胞表達，在神經元內表達很低，且主要集中在神經元的樹突棘，其功能涉及細胞骨架結構的形成、重塑及解體。Calponin-3與肌動蛋白絲相互作用抑制肌動蛋白絲在肌球蛋白上的滑動，從而限制樹突棘的回縮，提示calponin-3蛋白對樹突棘的活動有重要調節作用。樹突棘是從神經元樹突發出的小突起，內含豐富的肌動蛋白，是腦內信息處理和存儲的重要部位，它的結構和功能會隨著突觸活動的變化改變，即具有可塑性。近年有學者提出樹突棘病變是癲癇發生的原因之一，癲癇發作時突觸傳遞活動的變化可使樹突棘重塑，后者又導致新的突觸形成或原有突觸消失。