[發明專利]干擾LCYB、LCYE表達并超量表達CRTISO在制備紅色花瓣蕓薹屬植物中的應用

有效

• 申請號: 201410794025.3
• 申請日: 2014-12-19
• 公開（公告）號: CN104388464A
• 公開（公告）日: 2015-03-04
• 發明（設計）人: 柴友榮;劉雪;廖霏霏;金筱耘;付春;蔣佳怡;董博;李加納;徐新福;馬書語
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N15/66;C12N15/84;A01H5/00;A01H4/00
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司 11275
• 代理人: 王貴君

1.干擾蕓薹屬植物花瓣中β-環化酶基因LCYB、ε-環化酶基因LCYE表達同時超量表達類胡蘿卜素異構酶CRTISO基因在制備花瓣呈紅色的蕓薹屬植物品種中的應用。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述干擾蕓薹屬植物花瓣中β-環化酶基因LCYB、ε-環化酶基因LCYE表達的序列如SEQ?ID?NO.2所示，所述超量表達類胡蘿卜素異構酶CRTISO基因的序列如SEQ?ID?NO.3所示。

3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述干擾蕓薹屬植物花瓣中β-環化酶基因LCYB、ε-環化酶基因LCYE表達的序列由擬南芥花瓣特異啟動子PAtAP3介導表達，所述花瓣特異啟動子PAtAP3的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1第267位至第1044位所示。

4.根據權利要求1-3任一項所述的應用，其特征在于：所述蕓薹屬植物為甘藍型油菜(Brassica?napus)。

5.干擾蕓薹屬植物花瓣中β-環化酶基因LCYB、ε-環化酶基因LCYE表達同時超量表達類胡蘿卜素異構酶CRTISO基因的植物表達載體，其特征在于：所述植物載體包括由花瓣特異啟動子介導的表達β-環化酶基因LCYB、ε-環化酶基因LCYE?RNA干擾序列的表達框和由組成型啟動子介導表達類胡蘿卜素異構酶CRTISO基因的表達框。

6.根據權利要求5所述的植物表達載體，其特征在于：所述花瓣特異啟動子介導表達β-環化酶基因LCYB、ε-環化酶基因LCYE?RNA干擾序列的表達框依次由花瓣特異啟動子PAtAP3、SEQ?ID?NO.2所示的序列、間隔序列、SEQ?ID?NO.2所示的反向互補序列和NOS終止子組成。

7.根據權利要求5所述的植物表達載體，其特征在于：所述由組成型啟動子介導超量表達類胡蘿卜素異構酶CRTISO基因的表達框依次由CaMV35S啟動子，SEQ?ID?NO.3所示序列和NOS終止子組成。

8.權利要求5-7任一項所述植物表達載體的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：將SEQ?ID?NO.1所示序列經AscI和SwaI雙酶切后連入經同樣酶切的pFGC5941M質粒，得pFGC5941CEPE質粒，然后將SEQ?ID?NO.2所示的序列連入pFGC5941CEPE載體的PAtAP3啟動子與間隔序列之間，形成中間載體pFGC5941CEPE-B2RNAia，再將SEQ?ID?NO.2所示序列反向連入中間載體pFGC5941CEPE-B2RNAia的間隔序列與OCS終止子之間，得pFGC5941CEPE-B2RNAi載體，最后將SEQ?ID?NO.3所示序列通過NcoI和AscI酶切位點連入經同樣酶切的pFGC5941CEPE-B2RNAi載體，得干擾蕓薹屬植物花瓣中β-環化酶基因LCYB、ε-環化酶基因LCYE基因表達同時超量表達類胡蘿卜素異構酶CRTISO基因的植物表達載體。

9.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于：所述間隔序列為甘藍型油菜PAP2基因第2內含子。

10.利用權利要求5-7任一項所述植物表達載體制備花瓣呈紅色的蕓薹屬植物品種的方法，其特征在于，包括如下步驟：

a.將權利要求5-7任一項所述植物表達載體轉化農桿菌，制得工程菌；

b.將步驟a所得工程菌轉化蕓薹屬植物無菌苗的下胚軸，共培養后，在Basta除草劑抗性下誘導分化獲得再生苗，篩選陽性苗轉基因苗得花瓣呈紅色的蕓薹屬植物。