[發(fā)明專利]利用石墨烯納米材料獲取三維生長腫瘤細(xì)胞的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410794004.1
• 申請(qǐng)日: 2014-12-21
• 公開（公告）號(hào): CN104531618B
• 公開（公告）日: 2018-06-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱熹;汪敏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 朱熹
• 主分類號(hào): C12N5/09
• 分類號(hào): C12N5/09;C01B32/182;B82Y30/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.利用石墨烯納米材料獲取三維生長腫瘤細(xì)胞的方法，其特征在于，包含以下步驟：

1)將含有已經(jīng)培養(yǎng)好的貼壁腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)瓶取出，進(jìn)行貼壁細(xì)胞傳代操作，以制成細(xì)胞懸液；

2)分別取一定體積的細(xì)胞懸液接種于新培養(yǎng)瓶中，而后往瓶中加入含血清的培養(yǎng)液；

3)往步驟2）中的一個(gè)新培養(yǎng)瓶中加入適量已經(jīng)經(jīng)過真空高壓滅菌處理的石墨烯納米材料溶液；

4)將步驟3）的新培養(yǎng)瓶在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一段時(shí)間，即可以觀察到加入石墨烯納米材料溶液的培養(yǎng)瓶中有大量三維生長的腫瘤細(xì)胞；

5)可以交換步驟2）和3）且不影響最后結(jié)果,即可以往新培養(yǎng)瓶中加入石墨烯納米材料溶液再加入細(xì)胞懸液，而后進(jìn)行培養(yǎng)；所述的石墨烯納米材料，直徑范圍2納米到100納米，同時(shí)材料表面和邊緣含氧、氮、硫元素中的一種或幾種元素的官能團(tuán)，所述的官能團(tuán)選自羥基、羧基、羰基、氨基、烷基中的一種或幾種。

2.如權(quán)利要求1所述的利用石墨烯納米材料獲取三維生長腫瘤細(xì)胞的方法，其特征在于所述的貼壁腫瘤細(xì)胞為在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，表現(xiàn)為貼壁生長且接觸抑制。

3.如權(quán)利要求1所述的利用石墨烯納米材料獲取三維生長腫瘤細(xì)胞的方法，其特征在于所述的貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作，具有如下步驟：吸掉或倒掉舊培養(yǎng)液；往培養(yǎng)瓶中加入胰蛋白酶消化液進(jìn)行消化；發(fā)現(xiàn)細(xì)胞單層收縮出現(xiàn)空隙時(shí)吸掉消化液；加入含血清的培養(yǎng)液，反復(fù)吹打細(xì)胞，使其成細(xì)胞懸液。

4.如權(quán)利要求1所述的利用石墨烯納米材料獲取三維生長腫瘤細(xì)胞的方法，其特征在于所述的含氧的石墨烯納米材料的合成方法，包含以下步驟：將含有石墨成分的碳材料加入到濃硫酸、硝酸鈉和高錳酸鉀的溶液中，得到混合的黑色懸濁液，對(duì)其進(jìn)行超聲2個(gè)小時(shí)后，加熱180攝氏度并攪拌回流反應(yīng)超過24個(gè)小時(shí)，將溶液冷卻到室溫后加入大量去離子水，用碳酸鈉調(diào)節(jié)pH到8，將溶液放入截留分子量為2000Da的透析袋中，進(jìn)行透析超過3天，而后對(duì)透析袋外面的溶液進(jìn)行加熱蒸發(fā)干燥后得到干燥固體，即得到含氧的石墨烯納米材料。

5.如權(quán)利要求1所述的利用石墨烯納米材料獲取三維生長腫瘤細(xì)胞的方法，其特征在于所述的含氮的石墨烯納米材料的合成方法，包含以下步驟：將含有石墨成分的碳材料和檸檬酸加入到含氮的有機(jī)溶劑，所述的含氮的有機(jī)溶劑為二甲基甲酰胺（DMF），將黑色懸濁液放入到聚四氟乙烯高壓反應(yīng)釜中，加熱到200攝氏度并反應(yīng)超過5個(gè)小時(shí)，冷卻到室溫后，得到的液體通過0.22微米的過濾膜過濾，將濾液放入截留分子量為2000Da的透析袋中透析超過3天，去除多余的DMF，將溶液進(jìn)行加熱蒸發(fā)干燥后得到干燥固體，即得到含氮的石墨烯納米材料。

6.如權(quán)利要求1所述的利用石墨烯納米材料獲取三維生長腫瘤細(xì)胞的方法，其特征在于所述的含硫的石墨烯納米材料的合成方法，包含以下步驟：將含有石墨成分的碳材料、檸檬酸、含硫的有機(jī)物，所述含硫的有機(jī)物為二氯亞砜和硫代尿素中的一種或兩種，加入到水中且超聲2個(gè)小時(shí)，得到的黑色懸濁液加入到聚四氟乙烯高壓反應(yīng)釜中，加熱到200攝氏度并反應(yīng)超過5個(gè)小時(shí)，而后冷卻到室溫，將得到的液體通過0.22微米的過濾膜過濾，而后往濾液中加入乙醇，而后高速離心，將得到的沉淀水洗后加熱干燥后得到的干燥固體，即為含硫的石墨烯納米材料。

7.如權(quán)利要求1所述的利用石墨烯納米材料獲取三維生長腫瘤細(xì)胞的方法，其特征在于所述的含氧、氮、硫三種元素的石墨烯納米材料的合成方法，包含以下合成步驟：將權(quán)利要求4、5和6的所述步驟進(jìn)行任意排列組合而形成的合成步驟。