[發明專利]一種紫球藻胞外多糖吸附金屬離子的方法

有效

• 申請號: 201410793900.6
• 申請日: 2014-12-18
• 公開（公告）號: CN104591334A
• 公開（公告）日: 2015-05-06
• 發明（設計）人: 季延濱;李濤
• 申請（專利權）人: 天津三生生物科技有限公司
• 主分類號: C02F1/28
• 分類號: C02F1/28
• 代理公司: 天津諾德知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 12213
• 代理人: 王同勝

1.一種紫球藻胞外多糖吸附金屬離子的方法，其特征在于包括以下步驟：紫球藻的培養；紫球藻中胞外多糖的提取；紫球藻胞外多糖對金屬離子的吸附；紫球藻胞外多糖的解吸附。

2.根據權利要求1所述的紫球藻胞外多糖吸附金屬離子的方法，其特征在于所述紫球藻的培養步驟包括接種藻液的準備和紫球藻的培養，所述接種藻液的準備步驟為：將對數期的藻液離心，棄掉上清液，用無菌雙蒸水洗滌，離心，棄上清液取出吸附性的營養，重復兩次，將藻液接種到培養基中培養；

所述紫球藻的培養過程為：以KOCH培養基為基礎，在KOCH培養基中加入1.5％的瓊脂，將培養基制備好，在無菌室內超凈工作臺上，待培養基溫度降低而未凝固時，將藻液涂在培養基的表面，使藻群在平板表面生長，將其倒置在培養架上培養，培養室溫度為25℃，培養架的溫度為25℃±2℃，用日光燈照射，所用光強范圍為1500-8000Lx，在一定的光周期下，在培養基中加入0-1600mg/L的碳源、0.5-2mmol/L的氮源、質量分數1-3％的鹽溶液以及質量分數0-4％的葡萄糖培養，通氣速率200-400l/h，調節PH在7-10，每天固定時間搖瓶4次，振蕩培養的頻率為100-120次/分。

3.根據權利要求1所述的紫球藻胞外多糖吸附金屬離子的方法，其特征在于所述紫球藻胞外多糖的提取工藝為：取10ml對數期的藻懸液，在離心機上以4000r/min的離心速度離心15min后取上層清夜，用0.45μm的微孔濾膜過濾，加入乙醇沉淀，使用Sevag法除去蛋白，用苯酚-硫酸定糖法測定多糖含量，即用乙醇沉淀，收集沉淀后蒸餾水洗滌2次，烘干至恒重，電子天平稱重并保存；

或者將藻懸液用超聲波破碎得到紫球藻的破碎液，將破碎液與水按照質量1:4進行水浴抽提，得到的抽提液經過兩層濾紙過濾，濾液真空濃縮后得到濃縮液，將濃縮液脫掉蛋白后再次進行過濾，得到的濾液用4倍濾液體積的乙醇沉淀24h過濾，得到的濾餅用同藻液體積的水復溶，配置的溶液用自來水透析24h、再用蒸餾水透析24h，將得到的透析液冷凍干燥得到多糖。

4.根據權利要求1所述的紫球藻胞外多糖吸附金屬離子的方法，其特征在于所述紫球藻胞外多糖對金屬離子的吸附步驟為：獲取含金屬離子的溶液，調整所述溶液的pH值范圍為0-14，向溶液添加生物質吸附劑，所述生物質吸附劑的添加量為每升溶液20-40克，攪拌過濾得到富集有金屬離子的生物質吸附劑。

5.根據權利要求1所述的紫球藻胞外多糖吸附金屬離子的方法，其特征在于所述紫球藻胞外多糖的解吸附步驟為：將上述吸附了金屬離子的紫球藻吸附劑加入到堿性溶液或鹽溶液中進行解吸附，測量紫球藻吸附劑的解吸附率。

6.根據權利要求5所述的紫球藻胞外多糖吸附金屬離子的方法，其特征在于所述紫球藻胞外多糖的解吸附在0.1mol/L的碳酸鈉溶液中、25℃及PH＝1的條件下進行。

7.根據權利要求2所述的紫球藻胞外多糖吸附金屬離子的方法，其特征在于所述KOCH培養基的組成及各組成的含量為：KNO₃：0.75g/L，KH₂PO₄：0.025g/L，MgSO₄·7H₂O：0.2g/L，檸檬酸鐵(1％)：0.0025g，土壤浸出液：10g/L，海水500g/L，蒸餾水500g/L；

優選地，所述土壤浸出液經下述步驟配置而成：取土壤0.5kg至燒杯或三角瓶中加蒸餾水1000ml，瓶口用透氣塞封口，在水浴中沸水加熱2小時，冷卻后在無菌條件下過濾，取上清液，將滅菌蒸餾水加入上清液至總體積1000ml，得到所述土壤浸出液。

8.根據權利要求2所述的紫球藻胞外多糖吸附金屬離子的方法，其特征在于所述紫球藻的培養條件為：光照強度為2500Lx，光周期為14L：10D；鹽度1％；碳酸氫鈉濃度為400-1200mg/L；葡萄糖濃度為1％；通氣速率為280l/h，PH＝9，振蕩培養。

9.根據權利要求2所述的紫球藻胞外多糖吸附金屬離子的方法，其特征在于所述碳源為乳糖、葡萄糖、蔗糖、碳酸氫鈉、無水乙酸鈉中的一種，所述氮源為硝酸鉀、硝酸鈉、氯化銨、硫酸銨、醋酸銨中的一種。